Post-mortem appearances.
Virulence:
Length of time maintained.
Optimum medium?
Minimal lethal dose.
Exaltation and attenuation of virulence?
Toxin formation.
МАКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КУЛЬТУР.
При описании внешнего вида бактериального роста невооруженным глазом и при малом увеличении следует использовать описательные термины, введенные Честером (и включенные в следующую схему).
Твердые среды.
Чашечные культуры.—
Желатин.—Отметьте наличие или отсутствие разжижения окружающей среды. Если разжижение присутствует, отметьте форму и характер (см. стр. 269, «уколы»).
Агар.—В этой среде разжижения не происходит. Жидкость, обнаруженная на поверхности агара (или на дне пробирки в агаровых пробирочных культурах), является лишь водой, которая выделилась во время быстрого затвердевания среды и впоследствии сконденсировалась.
Желатин и агар.—Исследуйте колонии с интервалом в двадцать четыре часа.
(a) Невооруженным глазом.
(b) С помощью ручной лупы или часового стекла.
(c) Под малым увеличением (1 дюйм) микроскопа или с помощью небольшого препаровального микроскопа.
Различайте поверхностные и глубинные колонии и отметьте характеристики отдельных колоний.
(A) Размер.—Диаметр в миллиметрах в разном возрасте.
(B) Форма.—
Точечная: Размеры слишком малы для определения формы невооруженным глазом; крошечные, приподнятые, полусферические.
Круглая: Более или менее кругового очертания.
Эллиптическая: Более или менее овального очертания.
Неправильная: Очертания не соответствуют какой-либо распознаваемой форме.
Веретеновидная: Веретенообразная, сужающаяся на каждом конце.
Улиткообразная: Спиральная или скрученная, как раковина улитки (рис. 141, a).
Fig. 141.—Types of colonies: a, Cochleate; b, amœboid; c, mycelioid.
Амебоидная: Очень неправильная, струящаяся (рис. 141, b).
Мицелиоидная: Нитевидная колония с радиальным характером плесени (рис. 141, c).
Нитевидная: Неправильная масса слабо переплетенных нитей (рис. 142, a).
Хлопьевидная: Плотной шерстистой структуры.
Ризоидная: Неправильного, разветвленного, корнеподобного характера (рис. 142, b).
Конгломератная: Агрегат колоний одинакового размера и формы (рис. 142, c).
Торулоидная: Агрегат колоний, похожий на почкование дрожжевого растения (рис. 142, d).
Розеточная: Формой напоминающая розетку.
Fig. 142.—Types of colonies: a, Filamentous; b, rhizoid; c, conglomerate; d, toruloid.
(C) Возвышение поверхности.—
1. Общий характер поверхности в целом:
Плоская: Тонкая, листовидная, распространяющаяся по поверхности (рис. 143, a).
Эффузная: Распространенная по поверхности в виде тонкого, вуалеподобного слоя, более нежного, чем предыдущий.
Приподнятая: Рост толстый, с резкими террасовидными краями (рис. 143, b).
Выпуклая: Поверхность — сегмент круга, но очень полого выпуклая (рис. 143, c).
Пульвинатовидная: Поверхность — сегмент круга, но решительно выпуклая (рис. 143, d).
Капитатовидная: Поверхность полусферическая (рис. 143, e).
Умбиликатовидная: Имеющая центральную ямку или углубление (рис. 143, f).
Коническая: Конус с закругленной вершиной (рис. 143, g).
Умбонатная: Имеющая центральное выпуклое сосковидное возвышение (рис. 143, h).
2. Детальные характеристики поверхности:
Гладкая: Поверхность ровная, без каких-либо из следующих отличительных признаков.
Альвеолярная: Отмечена углублениями, разделенными тонкими стенками, так что напоминает соты (рис. 144).
Пунктированная: Покрыта точками, как от уколов булавкой.
Буллатная: Как волдыристая поверхность, поднимающаяся выпуклыми выступами, довольно грубая.
Везикулярная: Более или менее покрыта крошечными пузырьками из-за образования газа; более мелкая, чем буллатная.
Fig. 143.—Surface elevation of colonies: a, Flat; b, raised; c, convex; d, pulvinate; e, capitate; f, umbilicate; g, conical; h, umbonate.
Fig. 144.—Types of colonies—alveolate.
Веррукозная: Бородавчатая, несущая бородавчатые выступы.
Сквамозная: Чешуйчатая, покрытая чешуйками.
Эхинатная: Покрытая заостренными выступами.
Папиллатная: Покрытая сосковидными или мамма-подобными отростками.
Рутозная: Короткие неправильные складки из-за сморщивания поверхностного роста.
Гофрированная: Длинные складки из-за сморщивания.
Контурная: Неправильная, но плавно волнистая поверхность, напоминающая поверхность рельефной карты.
Римозная: Изобилующая трещинами, расщелинами или разломами.
(D) Внутренняя структура колонии (микроскопическая).—
Слабая рефракция: Контур и поверхность рельефа не сильно выражены.
Сильная рефракция: Контур и поверхность рельефа сильно выражены; плотные, не нитевидные колонии.
Fig. 145.—Types of colonies: a, Grumose; b, moruloid; c, clouded.
1. Общие:
Аморфная: Без какой-либо определенной структуры, такой как указано ниже.
Гиалиновая: Прозрачная и бесцветная.
Гомогенная: Структура однородна во всех частях колонии.
Гомохромная: Цвет однороден по всей площади.
2. Грануляции или пятнистость:
Мелкозернистая.
Крупнозернистая.
Грумозная: Более грубая, чем предыдущая, с комковатым видом и частицами в виде скоплений зерен (рис. 145, a).
Морулоидная: Имеющая характер шелковицы, сегментированная, посредством чего колония разделена на более или менее правильные сегменты (рис. 145, b).
Облаковидная: Имеющая бледный фон с нечетко выраженными пятнами более глубокого оттенка (рис. 145, c).
Fig. 146.—Types of colonies: a, Reticulate; b, gyrose; c, marmorated.
3. Маркировка или полосатость колонии:
Ретикулярная: В форме сети, как жилки листа (рис. 146, a).
Ареолярная: Разделенная на довольно неправильные или угловатые пространства более или менее определенными границами.
Гирозная: Отмеченная волнистыми линиями, расположенными неопределенно (рис. 146, b).
Марморированная: Показывающая слабые неправильные полосы или пересеченная жилкоподобными отметинами, как в мраморе (рис. 146, c).
Ривулозная: Отмеченная линиями, как реки на карте.
Римозная: Показывающая трещины, разломы или расщелины.
Fig. 147.—Types of colonies—curled.
4. Нитевидные колонии:
Нитевидная: Как определено ранее.
Хлопьевидная: Состоящая из нитей, плотно расположенных.
Курчавая: Нити в параллельных прядях, как локоны или колечки (рис. 147).
(E) Края колоний.—
Цельные: Без зубцов или делений (рис. 148, a).
Волнистые: Волнистые (рис. 148, b).
Репандовидные: Как край открытого зонтика (рис. 148, c).
Эрозивные: Как будто изъеденные, неправильно зубчатые (рис. 148, d).
Fig. 148.—Edges of colonies: a, Entire; b, undulate; c, repand; d, erose.
Лопастные.
Лобулятные: Мелколопастные (рис. 149, e).
Аурикулятные: С ушковидными лопастями (рис. 149, f).
Лацератные: Неправильно расщепленные, как будто разорванные (рис. 149, g).
Фимбриатные: Бахромчатые (рис. 149, h).
Цилиатные: Волосковидные расширения, расположенные радиально (рис. 149, j).
Хохолковые.
Нитевидная: Как определено ранее.
Курчавая: Как определено ранее.
Fig. 149.—Edges of colonies: e, Lobar-lobulate; f, auriculate; g, lacerate; h, fimbriate; i, ciliate.
(F) Оптические характеристики (по Шаттлворту).—
1. Общие характеристики:
Прозрачная: Пропускающая свет.
Стекловидная: Прозрачная и бесцветная.
Маслянистая: Прозрачная и желтая; от оливкового до цвета льняного масла.
Смолистая: Прозрачная и коричневая, цвета лака или смолы.
Полупрозрачная: Слабо прозрачная.
Фарфоровидная: Полупрозрачная и белая.
Опалесцирующая: Полупрозрачная; серовато-белая в отраженном свете.
Перламутровая: Полупрозрачная, серовато-белая, с жемчужным блеском.
Сальная: Полупрозрачная, желтоватая или серовато-белая.
Маслянистая (бутирозная): Полупрозрачная и желтая.
Восковидная: Полупрозрачная и цвета воска.
Непрозрачная.
Меловая: Непрозрачная и белая, известковая.
Матовая: Без блеска.
Блестящая: Сияющая.
Флуоресцирующая.
Переливающаяся.
2. Хромогенность:
Цвет пигмента.
Пигмент ограничен колониями.
Пигмент ограничен средой, окружающей колонии.
Пигмент присутствует в колониях и в среде.
Посевы штрихом или мазком.—
Желатин и агар.—Отметьте общие моменты, как указано для чашечных культур.
Сгущенная сыворотка крови.—Отметьте наличие или отсутствие разжижения среды. (Наличие конденсационной воды на дне пробирки не следует путать с разжижением среды.)
Все культуры на скошенной среде.—
1. Колонии изолированные: Размер, форма и т. д., как для чашечных культур (см. стр. 261).
2. Колонии сливающиеся: Возвышение поверхности и характер края, как для чашечных культур (см. стр. 263).
Хромогенность: Как для чашечных культур.
Культуры уколом в желатин.
(A) Поверхностный рост. — Как и для отдельных колоний в чашечных культурах (см. стр. 261).
Fig. 150.—Stab cultivations—types of growth: a, Filiform; b, beaded; c, echinate; d, villous; e, arborescent.
(B) Линия укола. —
Филиформный (нитевидный): равномерный рост без особых характеристик (рис. 150, a).
Нодозный (узловатый): состоящий из тесно сгруппированных колоний.
Четковидный: состоящий из редко расположенных или разобщенных колоний (рис. 150, b).
Папиллярный (сосочковый): покрытый сосочковидными выростами.
Эхинатный (шиповатый): покрытый игольчатыми выростами (рис. 150, c).
Виллезный (ворсинчатый): покрытый короткими, неразветвленными волосовидными выростами (рис. 150, d).
Плюмозный (перистый): нежный перистый рост.
Fig. 151.—Stab cultivations—types of growth: f, Crateriform; g, saccate; h, infundibuliform; j, napiform; k, fusiform; l, stratiform.
Арборесцентный (древовидный): разветвленный или древовидный, покрытый разветвленными волосовидными выростами (рис. 150, e).
(C) Зона разжижения (если присутствует). —
Кратериформный (чашевидный): разжижение желатина в форме блюдца (рис. 151, f).
Саккатный (мешковидный): форма удлиненного мешка, трубчато-цилиндрическая (рис. 151, g).
Инфундибулиформный (воронковидный): форма воронки, коническая (рис. 151, h).
Напиформный (реповидный): форма репы (рис. 151, j).
Фузиформный (веретеновидный): контур пастернака, суженный на обоих концах, наиболее широкий под поверхностью (рис. 151, k).
Стратиформный (пластовидный): разжижение, распространяющееся до стенок пробирки и горизонтально вниз (рис. 151, l).
(D) Характер разжиженного желатина. —
1. Пленка на поверхности.
2. Равномерное помутнение.
3. Зернистость.
4. Преимущественно прозрачный, но содержащий хлопья.
5. Осадок на дне разжиженной части.
(E) Образование пузырьков газа.
Культуры в толще агара (shake cultures). —
1. Наличие или отсутствие разжижения.
2. Образование пузырьков газа.
3. Основная масса роста на поверхности — аэробный.
4. Основная масса роста в глубине — анаэробный.
Жидкие питательные среды.
1. Поверхность жидкости. —
Наличие или отсутствие пены из-за пузырьков газа.
Наличие или отсутствие образования пленки.
Характер пленки.
2. Толща жидкости. —
Равномерное помутнение.
Хлопья во взвешенном состоянии.
Гранулы во взвешенном состоянии.
Прозрачная, с осадком на дне пробирки.
Окрашивание жидкости, наличие или отсутствие.
3. Осадок. —
Характер.
Количество.
Цвет.
Углеводные среды. —
Рост.
Реакция.
Газообразование.
Коагуляция или отсутствие коагуляции сывороточного альбумина (при использовании сред на сывороточной воде).
Культивирование на лакмусовом молоке. —
{Unaltered. 1. Reaction:{Acid. {Alkaline. 2. Odour. 3. Formation of gas. {Unaltered. 4. Consistency:{Peptonised (character of solution). {Coagulated. {hard: solid. 5. Clot: Character{soft: floculent. {ragged and broken up by gas bubbles.
(a) Сгусток не растворяется.
(b) Сгусток в конечном итоге пептонизируется: полностью, не полностью.
Получающийся раствор: прозрачный, мутный.
{Abundant. {Scanty. 6. Whey:{Clear. {Turbid. {Coagulated by boiling, or not.
МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.
В идеале препараты должны быть приготовлены из чистых культур через 4, 6, 8, 12, 18 и 24 часа; а затем с интервалами, скажем, в двадцать четыре часа в течение всего периода наблюдения, и исследованы —
(A) Живые. — 1. В висячей капле, для определения подвижности или неподвижности.
В этой связи необходимо помнить, что при определенных условиях окружающей среды (например, при исследовании в неподходящей среде, атмосфере, температуре и т. д.) подвижные бациллы могут не проявлять активности. Поэтому ни один микроорганизм не должен быть записан как неподвижный на основании только одного наблюдения; серия наблюдений в разном возрасте и при различных условиях должна составлять основу мнения об отсутствии истинного движения.
Размер. — В случае неподвижных или вялоподвижных организмов следует попытаться измерить несколько особей в каждой висячей капле с помощью окулярного микрометра или эйконометра (см. стр. 63) и усреднить результаты.
Если организм является спорообразующим, наблюдайте —
(a) Спорообразование. — Приготовьте культуры в висячей капле (см. стр. 78) из вегетативных форм организма, добавив в каплю на кончике платиновой иглы следы раствора мадженты (0,5%) или другого прижизненного красителя (см. стр. 77), чтобы облегчить наблюдение за явлением, сделав бациллы более отчетливыми.
Поместите препарат на предметный столик микроскопа; при необходимости используйте термостолик.
Настройте освещение и т. д. и выберите одиночную бациллу для наблюдения с помощью 1/6-дюймового объектива.
Замените 1/6-дюймовый объектив на 1/12-дюймовый иммерсионный и наблюдайте за образованием споры; если возможно, измерьте любые изменения размера, которые могут произойти, с помощью микрометра Рамсдена.
(b) Прорастание спор. — Приготовьте культуры в висячей капле из старых культур, в которых отсутствуют живые вегетативные формы, и наблюдайте процесс прорастания аналогичным образом.
Комфорт микроскописта значительно повышается в тех случаях, когда период наблюдения довольно длительный, за счет использования какой-либо формы глазного экрана перед неработающим глазом, подобного тому, который изображен на стр. 58 (рис. 49).
Если невозможно выполнить предложенный выше метод, действуйте следующим образом:
(a) Спорообразование. — Посейте организм в бульон и инкубируйте при оптимальных условиях.
Через регулярные интервалы, скажем каждые тридцать минут, берите петлю культуры и готовьте мазок на покровном стекле.
Фиксируйте, пока препарат еще влажный, в фиксирующем растворе сулемы.
Окрасьте анилиновым генциан-фиолетовым и частично обесцветьте 2% уксусной кислотой.
Заключите в среду, пронумеруйте последовательно, а затем исследуйте.
(b) Прорастание спор. — Подвергните густую эмульсию спор воздействию температуры 80° C в течение десяти минут в дифференциальном стерилизаторе (см. стр. 257).
Перенесите эмульсию в пробирку со стерильным питательным бульоном и инкубируйте.
Берите образцы из культуры в пробирке с интервалами, скажем, в пять минут.
Фиксируйте, окрашивайте и т. д. во влажном состоянии, как в пункте (a), и исследуйте.
(B) Фиксированные. — 2. В окрашенных препаратах.
(a) Для определения морфологических признаков:
Форма (см. классификацию, стр. 131).
Размер:
(a) Приготовьте мазки на покровных стеклах в разном возрасте и зафиксируйте путем воздействия температуры 115° C в течение двадцати минут в сушильном шкафу.
(b) Окрасьте препараты по методу Грама (если применимо) или разбавленным карболовым фуксином и заключите обычным способом.
(c) Измерьте (см. стр. 66) около двадцати пяти особей в каждом мазке с помощью микрометра Рамсдена или предметного микрометра и усредните результат.
Плеоморфизм: Если отмечен, запишите —
The predominant character of the variant forms.
On what medium or media they are observed.
At what period of development.
(b) Для демонстрации деталей структуры:
Жгутики: Если отмечены, запишите —
Method of staining (vide page 101).
Position and arrangement (vide page 136).
Number.
Споры: Если отмечены, запишите —
Method of staining.
Shape.
Size.
Position within the parent cell.
Condition, as to shape, of the parent cell (vide page 139).
Optimum medium and temperature.
Age of cultivation.
Conditions of environment as to temperature, atmosphere.
Method of germination (vide page 140).
Инволюционные формы: Если отмечены, запишите —
Method of staining.
Character (e. g., if living or dead).
Shape.
On what medium they are observed.
Age of medium.
Environment.
Метахроматические гранулы: Если отмечены, запишите —
Method of staining.
Character of granules.
Number of granules.
Colour of granules.
3. Реакции окрашивания. —
1. Метод Грама. — Положительный или отрицательный.
2. Метод Нейссера. — Если отмечены гранулы, запишите —
1. Position.
2. Number.
3. Метод Циль-Нильсена. — Кислотоустойчивый или обесцвеченный.
4. Простые анилиновые красители. — (Отметьте те, которые дают наилучшие результаты, с подробным описанием процессов окрашивания.)
Methylene-blue} Fuchsin} and their modifications. Gentian violet} Thionine blue}
БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.
Протестируйте культуры организма на наличие —
Растворимых ферментов — протеолитических, диастатических, инвертазы.
Органических кислот — (a) количественно — т. е. оцените общее производство кислоты; (b) качественно на муравьиную, уксусную, пропионовую, масляную, молочную.
Аммиака.
Нейтральных летучих веществ — этилового спирта, альдегида, ацетона.
Ароматических продуктов — индола, фенола.
Растворимых пигментов.
Проверьте способность к восстановлению (a) красящих веществ, (b) нитратов в нитриты.
Исследуйте газообразование — H2S, CO2, H2. Оцените соотношение между двумя последними газами.
Подготовьте все культуры для этих методов исследования при оптимальных условиях, предварительно определенных для каждого из организмов, которые предполагается исследовать, в отношении
(a) Reaction of medium;
(b) Incubation temperature;
(c) Atmospheric environment;
и ведите тщательный учет этих моментов, а также возраста культуры, использованной при окончательном исследовании.
Исследуйте культуры на наличие различных продуктов бактериального метаболизма через сорок восемь часов роста и никогда не забывайте исследовать «контрольную» (неинокулированную) пробирку или колбу со средой из той же партии, выдержанную в течение аналогичного периода при идентичных условиях.
Если результаты отрицательные, протестируйте дополнительные культуры через три дня, пять дней и десять дней.
1. Образование ферментов. —
(A) Протеолитические ферменты. — (Превращают белки в протеозы, пептоны и дальнейшие продукты гидролиза; например, B. pyocyaneus.)
Необходимые среды:
Сыворотка крови и сыворотка молока, которые были тщательно отфильтрованы через фарфоровую свечу.
Необходимые реактивы:
Ammonium sulphate.
Thirty per cent. caustic soda solution.
Copper sulphate, 0.5 per cent. aqueous solution.
One per cent. acetic acid solution.
Millon's reagent.
Glyoxylic acid solution.
Concentrated sulphuric acid.
Метод. —
1. Приготовьте культуры в большом объеме (50 мл) в колбе и инкубируйте.