1. Расставьте пять пробирок, помеченных от A до E, в нижнем ярусе штатива для пробирок.
2. В пробирку A пипеткой внесите 5 куб. см раствора гермицида-x 1:100.
В пробирку B пипеткой внесите 5 куб. см раствора гермицида-x 1:200.
В пробирку C пипеткой внесите 5 куб. см раствора гермицида-x 1:300.
В пробирку D пипеткой внесите 5 куб. см раствора гермицида-x 1:500.
В пробирку E пипеткой внесите 5 куб. см раствора гермицида-x 1:600.
3. Расставьте 20 пробирок с бульоном с желчными солями в верхнем ярусе штатива для пробирок в два ряда, те, что в переднем ряду, пронумеруйте последовательно слева направо 1–10, те, что в заднем ряду, 11–20.
4. Поместите квадратную проволочную корзину вместимостью около 50 пробирок близко к левой стороне штатива для пробирок для приема инокулированных пробирок.
5. Возьмите стерильную пипетку на 1 куб. см из футляра, возьмите стерильную резиновую шайбу пинцетом и вставьте кончик пипетки в центральное отверстие.
6. Положите пинцет на стол так, чтобы стерильные кончики выступали за край. Не вынимая пробирку из штатива, снимите ватную пробку с пробирки A и опустите пипетку с прикрепленной резиновой шайбой на открытое горлышко пробирки; с помощью пинцета, чтобы зафиксировать шайбу, протолкните пипетку через отверстие, пока кончик пипетки не достигнет нескольких миллиметров от дна пробирки (см. рис. 219).
7. Таким же образом установите пипетку и шайбу в горлышко каждой из других пробирок, B, C, D и E.
8. Установите электрические сигнальные часы, чтобы они прозвенели для начала эксперимента и через последующие интервалы в 2,5, 5, 25 и 30 минут.
9. Возьмите 0,5 куб. см эмульсии B. coli в стерильную пипетку, градуированную в десятых долях кубического сантиметра, и будьте готовы.
10. Как только прозвенит звонок, поднимите пипетку из пробирки A левой рукой и из заряженной пипетки, удерживаемой в правой руке, внесите 0,1 куб. см эмульсии B. coli в раствор 1:100. Затем верните пипетку и шайбу на место.
Fig. 219.—Test-tube rack.
11. Поднимите пробирку левой рукой и встряхните ее, чтобы смешать микроб и гермицид, возвращая при этом пипетку для внесения в правой руке.
12. Повторите процесс с пробирками B, C, D и E; затем опустите зараженную пипетку для внесения в банку с лизолом. Инокуляция пяти пробирок может быть выполнена очень быстро, но для каждой пробирки должно быть отведено 10 секунд.
13. Когда прозвенит звонок через 2,5 минуты, продуйте пипетку в пробирке A (это взбалтывает смесь микроба и гермицида и обеспечивает сбор справедливой пробы); дайте смеси войти в пипетку, и так как столбик жидкости поднимается значительно выше конечной градуировки, правый указательный палец, установленный над торцом пипетки перед тем, как ее поднять, удержит более 0,1 куб. см смеси внутри канала, когда кончик пипетки окажется вне жидкости в пробирке. Коснитесь кончиком пипетки внутренней стенки пробирки и дайте излишкам жидкости вытечь, удерживая в пипетке только 0,1 куб. см.
14. В то же время левой рукой снимите пробирку с желчными солями № 1 с верхнего яруса штатива, выньте ватную пробку рукой, в которой уже держите пипетку (относительное положение пипетки, пробки и пробирок с культурой практически такое же, как у платиновой петли, пробки и пробирки с культурой, показанных на рис. 68, стр. 74).
15. Введите кончик пипетки в пробирку с субкультурой и выдуйте смесь в среду — закройте пробирку пробкой и опустите ее в проволочную корзину. Верните пипетку с шайбой в пробирку А.
Как только кончик пипетки войдет в горлышко пробирки А, ее можно отпустить, так как она уже отрегулирована таким образом, что едва не касается дна пробирки, а эластичная шайба предотвратит повреждение пробирки.
Steps 13, 14 and 15 occupy on an average 10 seconds.
16. Repeat steps 13, 14 and 15 with each of the other tubes B, C, D and E.
17. Repeat these various steps 13-16 when the bell rings at 5, 25 and 30 minutes.
18. Поместите все инокулированные пробирки в инкубатор при температуре 37° C.
19. Исследуйте пробирки с интервалом в 24 часа и запишите результаты в табличной форме, как показано в таблице на стр. 491 (цифры в квадратах указывают количество часов, через которое впервые появились изменения в среде вследствие роста B. coli).
20. Если рассмотрение табличных результатов указывает на концентрации Germicide-x, летальные через 2-1/2 и 30 минут, можно организовать окончательный тест; если же этот результат не был достигнут, вероятно, будет получено достаточно данных для планирования второго пробного теста, который даст необходимую информацию.
Окончательный тест.
c. Определение фенольного коэффициента.
X-дезинфектант. — Это включает два отдельных теста: один для Germicide-x, другой для стандартного фенола.
1. Установите пять четко промаркированных пробирок в нижний ярус штатива.
2. Пипеткой внесите в каждую по 5 куб. см соответствующих пяти процентных растворов x-дезинфектанта, которые, как показал пробный запуск, будут включать те, что обеспечивают летальные значения через 2-1/2 и 30 минут.
3. Разместите 20 пробирок с бульоном на желчных солях в верхнем ярусе штатива для пробирок в два ряда: пробирки в переднем ряду пронумеруйте последовательно слева направо 1-10, в заднем ряду — 11-20.
4. Подготовьте еще 20 пробирок с бульоном на желчных солях, пронумерованных 21-40, в два ряда во втором меньшем штативе, который можно поставить на верхний ярус штатива, как только первые 20 пробирок будут инокулированы.
5. Поставьте квадратную проволочную корзину вместимостью около 50 пробирок вплотную слева от штатива для пробирок для приема инокулированных пробирок.
6. Установите стерильную пипетку объемом 1 куб. см в горлышко каждой из пробирок A, B, C, D и E с помощью шайбы, как описано ранее.
7. Установите электрические сигнальные часы так, чтобы они звонили в начале эксперимента, а затем через 2-1/2, 5, 10, 15, 20, 25, 30 и 35 минут.
8. Выполните действия в точности так, как указано в разделе «Пробные запуски», шаги 9-19.
Контрольный фенол.
Сразу после инокуляции пробирки с субкультурой из 30-минутного периода контакта проведите точно такой же эксперимент, в котором пять процентных концентраций фенола (например, 1,1, 1,0, 0,9, 0,75, 0,7) размещены в нижнем ярусе штатива для пробирок вместо пяти концентраций Germicide-x.
Рассчитайте фенольный коэффициент следующим методом:
(a) Разделите цифру, представляющую процентную концентрацию самого слабого летального разведения контрольного карболового раствора при 2-1/2-минутном периоде контакта, на цифру, представляющую процентную концентрацию самого слабого летального разведения x-дезинфектанта за тот же период. Частное = фенольный коэффициент через 2-1/2 минуты.
(b) Аналогичным образом получите фенольный коэффициент при 30-минутном периоде контакта.
(c) Запишите среднее значение двух коэффициентов, полученных в (a) и (b), как средний фенольный коэффициент или просто как фенольный коэффициент.
Детали окончательного теста фактического определения приведены в прилагаемой таблице.
ТАБЛИЦА 27
Organism employed, B. Coli Communis.
Culture Medium, Nutrient Agar (+10). Age, 24 hrs. Temp. of Incubation, 37°C.
Quantities used{ Culture}Emulsion 0.1 c.c. + 5 c.c. Germicide. { Emulsion }
Room Temperature during Experiments, 17°C. GermicideStrengthTime of exposureIncubation 2-1/25101520253035TimeTemp. 1 Germicide-x4%————————7 days.37°C. 2 Germicide-x3%48———————7 days.37°C. 3 Germicide-x2%242424244872......7 days.37°C. 4 Germicide-x1%24242424722472...7 days.37°C. 5 Germicide-x0.5%242424242424242424 hours.37°C. 1 Phenol1.10%————————7 days.37°C. 2 Phenol1.00%24.....................7 days.37°C. 3 Phenol0.75%2424242448.........7 days.37°C. 4 Phenol0.70%242424242472......7 days.37°C. 5 Phenol0.65%24242424244824242 days.37°C.
((1.10/4.00) + (0.7/2.0)) 0.27 + 0.35 .62 Phenol Coefficient=————————————=——————=——=0.31 2 2 2
ПРИЛОЖЕНИЕ.
МЕТРИЧЕСКАЯ И ИМПЕРСКАЯ СИСТЕМЫ ВЕСОВ И МЕР.
Исходной единицей метрической системы является метр (м) или единица длины, представляющая одну четырехмиллионную часть окружности Земли вокруг полюсов.
Единицей массы является грамм (г), который представляет вес одного кубического сантиметра воды при ее максимальной плотности (а именно 4° C и давлении ртутного столба 760 мм).
Единицей измерения объема является литр (л), который представляет объем одного килограмма дистиллированной воды при ее максимальной плотности.
Десятичные подразделения каждой из единиц обозначаются латинскими приставками milli = 1/1000; centi = 1/100; deci = 1/10; кратные каждой единицы — греческими приставками deka = 10; hecto = 100; kilo = 1000; myria = 10 000.
Для сравнения значений некоторых наиболее часто используемых выражений метрической системы и имперской системы может оказаться удобным для справки следующее:
Длина:
1 миллиметр (= 1 мм) = 1/25 дюйма.
1 сантиметр (= 1 см) = 2/5 дюйма.
1 дюйм (1") = 25 миллиметров или 2-1/2 сантиметра.
Масса:
1 миллиграмм (= 1 мг) = 0,01543 грана (или приблизительно 1/64 грана).
1 грамм (= 1 г) = 15,4323 грана.
1 «кило» или килограмм (= 1 кг) = 2 фунта, 3-1/4 унции эвердьюпойс.
1 фунт эвердьюпойс (= 1 фунт) = 453,592 грамма.
1 унция эвердьюпойс (= 1 унция) = 28,35 грамма.
1 гран = 0,0648 грамма или 64,8 миллиграмма.
Объем:
1 кубический сантиметр (= 1 куб. см) = 16,9 минима имперской меры.
1 литр (= 1 л) = 35,196 жидкой унции имперской меры.
1 жидкая унция имперской меры (= 1 ℥) = 28,42 кубических сантиметра.
1 пинта имперской меры (= 1 O.) = 568,34 кубических сантиметра.
1 галлон имперской меры (= 1 C.) = 4,546 литра, или 10 фунтов эвердьюпойс чистой воды при 62° F и атмосферном давлении 30 дюймов ртутного столба.
Коэффициенты для пересчета из одной системы в другую.
To convert grammes into grains× 15.432. To convert grammes into ounces avoirdupois× 0.03527. To convert kilogrammes into pounds× 2.2046. To convert cubic centimetres into fluid ounces imperial× 0.0352. To convert litres into fluid ounces imperial× 35.2. To convert metres into inches× 39.37. To convert grains into grammes× 0.0648. To convert avoirdupois ounces into grammes× 28.35. To convert troy ounces into grammes× 31.104. To convert fluid ounces into cubic centimetres× 28.42. To convert pints into litres× 0.568. To convert inches into metres× 0.0254.
ТАБЛИЦА ДЛЯ ПЕРЕСЧЕТА ГРАДУСОВ ЦЕЛЬСИЯ В ГРАДУСЫ ФАРЕНГЕЙТА.
X° C. = ((9x/5) + 32)° F.
Cent. Faht. Cent. Faht. Cent. Faht. 0 32.0 34 93.2 68 154.4 1 33.8 35 95.0 69 156.2 2 35.6 36 96.8 70 158.0 3 37.4 37 98.6 71 159.8 4 39.2 38 100.4 72 161.6 5 41.0 39 102.2 73 163.4 6 42.8 40 104.0 74 165.2 7 44.6 41 105.8 75 167.0 8 46.4 42 107.6 76 168.8 9 48.2 43 109.4 77 170.6 10 50.0 44 111.2 78 172.4 11 51.8 45 113.0 79 174.2 12 53.6 46 114.8 80 176.0 13 55.4 47 116.6 81 177.8 14 57.2 48 118.4 82 179.6 15 59.0 49 120.2 83 181.4 16 60.8 50 122.0 84 183.2 17 62.6 51 123.8 85 185.0 18 64.4 52 125.6 86 186.8 19 66.2 53 127.4 87 188.6 20 68.0 54 129.2 88 190.4 21 69.8 55 131.0 89 192.2 22 71.6 56 132.8 90 194.0 23 73.4 57 134.6 91 195.8 24 75.2 58 136.4 92 197.6 25 77.0 59 138.2 93 199.4 26 78.8 60 140.0 94 201.2 27 80.6 61 141.8 95 203.0 28 82.4 62 143.6 96 204.8 29 84.2 63 145.4 97 206.6 30 86.0 64 147.2 98 208.4 31 87.8 65 149.0 99 210.2 32 89.6 66 150.8 100 212.0 33 91.4 67 152.6
ТАБЛИЦА ДЛЯ ПЕРЕСЧЕТА ГРАДУСОВ ФАРЕНГЕЙТА В ГРАДУСЫ ЦЕЛЬСИЯ.
X° F. = (5(x - 32))/9° C.
Faht.Cent. Faht.Cent. Faht.Cent. Faht.Cent. Faht.Cent. 320. 6820.0 10440.0 14060.0 17680.0 330.6 6920.6 10540.6 14160.6 17780.6 341.1 7021.1 10641.1 14261.1 17881.1 351.7 7121.7 10741.7 14361.7 17981.7 362.2 7222.2 10842.2 14462.2 18082.2 372.8 7322.8 10942.8 14562.8 18182.8 383.3 7423.3 11043.3 14663.3 18283.3 393.9 7523.9 11143.9 14763.9 18383.9 404.4 7624.4 11244.4 14864.4 18484.4 415.0 7725.0 11345.0 14965.0 18585.0 425.6 7825.6 11445.6 15065.6 18685.6 436.1 7926.1 11546.1 15166.1 18786.1 446.7 8026.7 11646.7 15266.7 18886.7 457.2 8127.2 11747.2 15367.2 18987.2 467.8 8227.8 11847.8 15467.8 19087.8 478.3 8328.3 11948.3 15568.3 19188.3 488.9 8428.9 12048.9 15668.9 19288.9 499.4 8529.4 12149.4 15769.4 19389.4 5010.0 8630.0 12250.0 15870.0 19490.0 5110.6 8730.6 12350.6 15970.6 19590.6 5211.1 8831.1 12451.1 16071.1 19691.1 5311.7 8931.7 12551.7 16171.7 19791.7 5412.2 9032.2 12652.2 16272.2 19892.2 5512.8 9132.8 12752.8 16372.8 19992.8 5613.3 9233.3 12853.3 16473.3 20093.3 5713.9 9333.9 12953.9 16573.9 20193.9 5814.4 9434.4 13054.4 16674.4 20294.4 5915.0 9535.0 13155.0 16775.0 20395.0 6015.6 9635.6 13255.6 16875.6 20495.6 6116.1 9736.1 13356.1 16976.1 20596.1 6216.7 9836.7 13456.7 17076.7 20696.7 6317.2 9937.2 13557.2 17177.2 20797.2 6417.8 10037.8 13657.8 17277.8 20897.8 6518.3 10138.3 13758.3 17378.3 20998.3 6618.9 10238.9 13858.9 17478.9 21098.9 6719.4 10339.4 13959.4 17579.4 21199.4 212100.0
Формула процентного содержания для добавления солей и т. д. в готовые питательные среды.
Формула для приготовления желаемого процентного содержания данной соли и т. д. в питательных средах в пробирках; например, для приготовления 4-процентного раствора KNO3 в серии пробирок с бульоном, каждая из которых содержит 10 см³ среды, при наличии 25-процентного исходного водного раствора нитрата калия.
(N + X) Y A (X) ———————=————— 100 100
N = количество кубических сантиметров, содержащихся в каждой пробирке.
X = количество исходного раствора, которое необходимо добавить в каждую пробирку.
Y = требуемый процент в среде.
A = процентное содержание исходного раствора.
Тогда
(10 + X) 4 25X ——————=——— 100 100
Therefore, 40 + 4X = 25X.
Therefore, 21X = 40.
X = 1.9 c.c.
Это учитывает раствор, добавляемый к исходному объему среды.
Следовательно, 10 см³ бульона + 1,9 см³ 25-процентного водного раствора KNO3 дают 11,9 см³ среды, содержащей 4% KNO3.
ТАБЛИЦЫ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ РАЗВЕДЕНИЙ
(сыворотки, дезинфицирующих средств или других веществ).
При оценке содержания агглютинина или титра сыворотки, тестировании дезинфицирующих средств и для многих других целей возникает необходимость приготовления серии разведений исследуемого материала, и во избежание излишних трудозатрат удобно придерживаться определенной шкалы приращения, например, следующей:
От разведений 1:10 до 1:80 повышение с шагом 5. От разведений 1:80 до 1:200 повышение с шагом 10. От разведений 1:200 до 1:400 повышение с шагом 25. От разведений 1:400 до 1:500 повышение с шагом 50. От разведений 1:500 до 1:1000 повышение с шагом 100. От разведений 1:1000 до 1:5000 повышение с шагом 250. От разведений 1:5000 до 1:10 000 повышение с шагом 1000. От разведений 1:10 000 до 1:100 000 повышение с шагом 5000. От разведений 1:100 000 до 1:1 000 000 повышение с шагом 100 000.
При работе с веществом неизвестной силы — что особенно верно в отношении агглютинирующих сывороток — принято проводить предварительный тест, используя несколько широко разнесенных разведений, которые можно получить следующим образом:
Первое разведение — I.
1 см³ сыворотки + 9 см³ физиологического раствора = 10-процентный раствор или разведение 1:10 (из которого 1 см³ содержит 0,1 см³ исходной сыворотки).
При работе с жидкостями, отличными от сыворотки, разбавителем обычно служит дистиллированная вода; если же исходное вещество является твердым, инструкции будут выглядеть так:
1 грамм исходного вещества + 10 см³ дистиллированной воды = 10-процентный раствор и т. д.
Второе разведение — II.
1 см³ первого разведения + 9 см³ физиологического раствора = 1-процентный раствор или разведение 1:100.
Третье разведение — III.
1 см³ второго разведения + 9 см³ физиологического раствора = 1-промилле раствор или разведение 1:1000.
Четвертое разведение — IV.
1 c.c. second dilution + 9 c.c. normal saline solution = 0.1 per mille solution or 1: 10,000 dilution.
Следующие таблицы, показывающие вторичные разведения, которые можно легко приготовить из каждого из этих четырех первичных разведений для использования при последующем определении точного титра, вероятно, окажутся полезными для тех, кто не является математиком.
ТАБЛИЦЫ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ РАЗВЕДЕНИЙ.
TABLE I
Using 10 % stock solution First dilution + Diluent TABLE II Using 1% stock solution Second dilution + Diluent 1: 10 = 1 c.c. + 0 c.c. 1: 100 = 1 c.c. + 0 c.c. 1: 15 = 1 c.c. + 0.5 c.c. 1: 110 = 1 c.c. + 0.1 c.c. 1: 20 = 1 c.c. + 1.0 c.c. 1: 120 = 1 c.c. + 0.2 c.c. 1: 25 = 1 c.c. + 1.5 c.c. [1: 125 = 1 c.c. + 0.25 c.c.] 1: 30 = 1 c.c. + 2.0 c.c. 1: 130 = 1 c.c. + 0.3 c.c. 1: 35 = 1 c.c. + 2.5 c.c. 1: 140 = 1 c.c. + 0.4 c.c. 1: 40 = 1 c.c. + 3.0 c.c. 1: 150 = 1 c.c. + 0.5 c.c. 1: 45 = 1 c.c. + 3.5 c.c. 1: 160 = 1 c.c. + 0.6 c.c. 1: 50 = 1 c.c. + 4.0 c.c. 1: 170 = 1 c.c. + 0.7 c.c. 1: 55 = 1 c.c. + 4.5 c.c. [1: 175 = 1 c.c. + 0.75 c.c.] 1: 60 = 1 c.c. + 5.0 c.c. 1: 180 = 1 c.c. + 0.8 c.c. 1: 65 = 1 c.c. + 5.5 c.c. 1: 190 = 1 c.c. + 0.9 c.c. 1: 70 = 1 c.c. + 6.0 c.c. 1: 200 = 1 c.c. + 1.0 c.c. 1: 75 = 1 c.c. + 6.5 c.c.————————————————- 1: 80 = 1 c.c. + 7.0 c.c. 1: 200 = 1 c.c. + 1.0 c.c. ——————————————— 1: 225 = 1 c.c. + 1.25 c.c. 1: 80 = 1 c.c. + 7.0 c.c. 1: 250 = 1 c.c. + 1.5 c.c. 1: 90 = 1 c.c. + 8.0 c.c. 1: 275 = 1 c.c. + 1.75 c.c. 1: 100 = 1 c.c. + 9.00 c.c. 1: 300 = 1 c.c. + 2.0 c.c. 1: 110 = 1 c.c. + 10.0 c.c. 1: 325 = 1 c.c. + 2.25 c.c. 1: 120 = 1 c.c. + 11.0 c.c. 1: 350 = 1 c.c. + 2.5 c.c. [1: 125 = 1 c.c. + 11.5 c.c.] 1: 375 = 1 c.c. + 2.75 c.c. 1: 130 = 1 c.c. + 12.0 c.c. 1: 400 = 1 c.c. + 3.0 c.c. 1: 140 = 1 c.c. + 13.0 c.c.————————————————- 1: 150 = 1 c.c. + 14.0 c.c. 1: 400 = 1 c.c. + 3.0 c.c. 1: 160 = 1 c.c. + 15.0 c.c. 1: 450 = 1 c.c. + 3.5 c.c. 1: 170 = 1 c.c. + 16.0 c.c. 1: 500 = 1 c.c. + 4.0 c.c. [1: 175 = 1 c.c. +-16.5 c.c.]————————————————- 1: 180 = 1 c.c. + 17.0 c.c. 1: 500 = 1 c.c. + 4.0 c.c. 1: 190 = 1 c.c. + 18.0 c.c. 1: 600 = 1 c.c. + 5.0 c.c. 1: 200 = 1 c.c. + 19.0 c.c. 1: 700 = 1 c.c. + 6.0 c.c. ———————— —————— [1: 750 = 1 c.c. + 6.5 c.c.] 1: 200 = 1 c.c. + 19.0 c.c. 1: 800 = 1 c.c. + 7.0 c.c. 1: 225 = 1 c.c. + 21.5 c.c. 1: 900 = 1 c.c. + 8.0 c.c. 1: 250 = 1 c.c. + 24.0 c.c. 1: 1000 = 1 c.c. + 9.0 c.c. 1: 275 = 1 c.c. + 26.5 c.c.———————————————— 1: 300 = 1 c.c. + 29.0 c.c. 1: 1000 = 1 c.c. + 9.0 c.c. 1: 325 = 1 c.c. +-31.5 c.c. 1: 2000 = 1 c.c. + 19.0 c.c. 1: 350 = 1 c.c. + 34.0 c.c. 1: 3000 = 1 c.c. + 29.0 c.c. 1: 375 = 1 c.c. + 36.5 c.c. 1: 4000 = 1 c.c. + 39.0 c.c. 1: 400 = 1 c.c. + 39.0 c.c. 1: 5000 = 1 c.c. + 49.0 c.c. ——————————————————————————————— 1: 400 = 1 c.c. + 39.0 c.c. 1: 450 = 1 c.c. + 44.5 c.c. 1: 500 = 1 c.c. + 49.0 c.c.