«Основы бактериологической техники»

Электронный текст подготовлен Сюзанной Лайбарджер, Брайаном Джейнсом, Жозефиной Паолуччи и командой онлайн-корректоров проекта «Гутенберг» (http://www.pgdp.net)

Примечание корректора: Для чисел и уравнений добавлены скобки для уточнения дробей. Исправлены незначительные опечатки.

ОСНОВЫ

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ

ТЕХНИКИ

ЛАБОРАТОРНОЕ РУКОВОДСТВО ДЛЯ СТУДЕНТОВ МЕДИЦИНСКИХ, СТОМАТОЛОГИЧЕСКИХ И ТЕХНИЧЕСКИХ СПЕЦИАЛЬНОСТЕЙ

ДЖ. У. Х. ЭЙРА, M.D., M.S., F.R.S. (Эдинбург)

ДЖ. У. Х. ЭЙРА, M.D., M.S., F.R.S. (Эдинбург)

Директор бактериологического отделения больницы Гая, Лондон, и преподаватель бактериологии в медицинских и стоматологических школах; в прошлом преподаватель бактериологии в медицинской школе больницы Чаринг-Кросс и бактериолог больницы Чаринг-Кросс; в разное время хантерианский профессор Королевского колледжа хирургов, Англия

ВТОРОЕ ИЗДАНИЕ, ПЕРЕРАБОТАННОЕ И ДОПОЛНЕННОЕ

ФИЛАДЕЛЬФИЯ И ЛОНДОН ИЗДАТЕЛЬСТВО У. Б. СОНДЕРСА 1913

Авторское право, 1902 г., У. Б. Сондерс энд Компани. Пересмотрено, полностью перенабрано, переиздано и перерегистрировано в июле 1913 г. Авторское право, 1913 г., У. Б. Сондерс Компани. Зарегистрировано в Стейшнерс-холле, Лондон, Англия. ОТПЕЧАТАНО В АМЕРИКЕ. ТИПОГРАФИЯ У. Б. СОНДЕРС КОМПАНИ, ФИЛАДЕЛЬФИЯ

ПАМЯТИ ДЖОНА УИЧЕНФОРДА УОШБОРНА, C.M.G., M.D., F.R.C.P. Врача больницы Гая и преподавателя бактериологии в медицинской школе, врача Лондонской инфекционной больницы, МОЕГО УЧИТЕЛЯ, ДРУГА И СОТРУДНИКА

ПРЕДИСЛОВИЕ КО ВТОРОМУ ИЗДАНИЮ

Бактериология — это по существу практическая дисциплина, и даже основы ее техники могут быть усвоены только путем личного обучения в лаборатории. Это самоочевидное положение, не требующее подчеркивания, однако я осмелюсь полагать, что предыдущий сборник проверенных и надежных методов уже принес некоторую пользу не только студентам в отсутствие преподавателя, но и специалистам, работающим в одиночку в лабораториях, удаленных от учебных центров, напоминая им о забытых деталях уже освоенных методов. Если это предположение верно, то для настоящего пересмотренного издания, в котором изменения носят главным образом характер дополнений, вызванных необходимостью внедрения новых методов в последние годы, не требуется дальнейших оправданий.

Я пользуюсь этой возможностью, чтобы выразить глубокую признательность моему коллеге по физиологическому отделению нашей медицинской школы г-ну Дж. Х. Райффелю, B. C., B. Sc., который пересмотрел страницы, посвященные анализу продуктов метаболизма жизнедеятельности бактерий; моим коллегам по бактериологическому отделению больницы Гая за их готовность к сотрудничеству при разработке или проверке новых методов; и, наконец, моему главному лаборанту г-ну Дж. К. Тернеру, чья помощь и опыт были для меня чрезвычайно ценны при подготовке этого тома. Я также благодарю миссис Констанс Пондер за многие новые линейные рисунки и за перерисовку ряда оригинальных иллюстраций.

John W. H. Eyre.

Guy's Hospital, S. E.

July, 1913.

ПРЕДИСЛОВИЕ К ПЕРВОМУ ИЗДАНИЮ

На следующих страницах я попытался кратко и лаконично изложить различные методы, используемые в настоящее время для изучения бактерий и прояснения тех аспектов их жизненного цикла, которые являются спорными или до сих пор не установлены.

Из этих методов некоторые являются новыми, другие — нет, но все они надежны; включены только те, которые способны дать удовлетворительные результаты даже в руках начинающих. По сути, большая часть материала представляет собой просто расширение машинописных заметок, распространявшихся среди некоторых моих лабораторных групп по практической и прикладной бактериологии; следовательно, была предпринята попытка представить основы бактериологической техники в их логической последовательности.

Я не приношу извинений за место, отведенное иллюстрациям, почти все из которых были подготовлены специально для этого тома; ведь рисунок, если он хорош, обладает более высокой образовательной ценностью и создает более точное впечатление, чем страница печатного текста; и даже эскизы аппаратуры служат определенной цели, подсказывая студенту те изменения и модификации, которые могут стать необходимыми или желательными в зависимости от характера его лабораторного оборудования.

Я полностью принял превосходную и уместную терминологию, введенную Честером в его недавней работе «Определительная бактериология», поскольку считаю, что ее нужно лишь использовать, чтобы убедиться в ее чрезвычайной полезности, в то время как включение ее в элементарное руководство призвано привить студенту навыки точного наблюдения и лаконичного описания.

За исключением раздела XVII — «Очерки по изучению патогенных бактерий», — введенного с целью завершения тома с точки зрения студента-медика и стоматолога, работа была организована так, чтобы позволить использовать ее в качестве лабораторного руководства техническими специалистами в целом, будь то в области пивоварения, молочного дела или сельского хозяйства.

Я настолько осознаю многие недостатки этой книги, что кажется почти излишним заявлять, что она ни в коем случае не претендует на роль конкурента многим превосходным руководствам по бактериологии, используемым в настоящее время, а лишь стремится дополнить обычно скудные детали техники и научить студента тому, как устанавливать и адаптировать аппаратуру для своей повседневной работы, а также как тщательно и систематически выполнять различные бактериоскопические анализы, которые ежедневно требуются бактериологу со стороны гигиениста.

Наконец, с большим удовольствием выражаю признательность за ценную помощь, полученную от моего бывшего ассистента г-на Дж. Б. Галла, A. I. C., при подготовке раздела, посвященного химическим продуктам жизнедеятельности бактерий, который был основан на работе Лемана.

John W. H. Eyre.

Guy's Hospital, S. E.

CONTENTS

Страница I. Лабораторные правила 1 II. Стеклянная аппаратура общего пользования 3 Выбор, подготовка и уход за стеклянной посудой 8 — Очистка стеклянной аппаратуры 18 — Закупоривание пробирок и колб 24 III. Методы стерилизации 26 Стерилизующие агенты 26 — Методы применения 27 — Электрические сигнальные часы 38 IV. Микроскоп 49 Основы 49 — Принадлежности 57 — Методы микрометрии 61 V. Микроскопическое исследование бактерий и других микрогрибов 69 Аппаратура и реагенты, используемые при обычном микроскопическом исследовании 69 — Методы исследования 74 VI. Методы окрашивания 90 Бактериальные красители 90 — Контрастные красители 93 — Тканевые красители 95 — Красители для крови 97 — Методы демонстрации структуры бактерий 99 — Дифференциальные методы окрашивания 108 VII. Методы демонстрации бактерий в тканях 114 Метод замораживания 115 — Парафиновый метод 117 — Специальные методы окрашивания срезов 121 VIII. Классификация грибов 126 Морфология гифомицетов 126 — Морфология бластомицетов 129 IX. Шизомицеты 131 Анатомия 134 — Физиология 136 — Биохимия 144 X. Питательные среды 146 Мясной экстракт 148 — Стандартизация сред 154 — Фильтрация сред 156 — Хранение сред в больших количествах 159 — Разлив питательных сред в пробирки 160 XI. Обычные или основные культуральные среды 163 XII. Специальные среды 182 XIII. Инкубаторы 216 XIV. Методы культивирования 221 Аэробные 222 — Анаэробные 236 XV. Методы изоляции 248 XVI. Методы идентификации и изучения 259 Схема изучения 259 — Макроскопическое исследование культур 261 — Микроскопические методы 272 — Биохимические методы 276 — Физические методы 295 — Методы инокуляции 315 — Иммунизация 321 — Активная иммунизация 322 — Приготовление гемолитической сыворотки 327 — Титрование гемолитической сыворотки 328 — Хранение гемолизина 331 XVII. Экспериментальная инокуляция животных 332 Выбор и уход за животными 335 — Методы инокуляции 352 XVIII. Изучение экспериментальных инфекций при жизни 370 Общие наблюдения 371 — Исследования крови 373 — Серологические исследования 378 — Агглютинин 381 — Опсонин 387 — Иммунное тело 393 XIX. Патологоанатомическое вскрытие экспериментальных животных 396 XX. Изучение патогенных бактерий 408 XXI. Бактериологические анализы 415 Бактериологическое исследование воды 416 — Исследование молока 441 — Мороженое 457 — Исследование сливок и масла 457 — Исследование недоброкачественного мяса 460 — Исследование устриц и других моллюсков 463 — Исследование сточных вод и их стоков 466 — Исследование воздуха 468 — Исследование почвы 470 — Тестирование фильтров 478 — Тестирование дезинфицирующих средств 480 Приложение 492 Указатель 505

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА.

I. ЛАБОРАТОРНЫЕ ПРАВИЛА.

Следующие правила установлены для соблюдения в бактериологических лабораториях под руководством автора. Аналогичные правила должны соблюдаться во всех лабораториях, где изучаются патогенные бактерии.

Больница Гая.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ.

ОБРАЩЕНИЕ С ИНФЕКЦИОННЫМИ МАТЕРИАЛАМИ.

Следующие правила были составлены в интересах тех, кто работает в лаборатории, а также широкой общественности, и будут строго соблюдаться.

Их цель — избежать опасностей заражения, которые могут возникнуть из-за пренебрежения необходимыми мерами предосторожности или из-за небрежности.

Каждый должен принять к сведению, что, пренебрегая установленными общими правилами, он не только подвергает серьезному риску себя, но и представляет опасность для других.

ПРАВИЛА.

1. Каждый работник должен носить халат или спецодежду, приобретенную за свой счет, которая должна храниться в лаборатории.

2. Руки необходимо дезинфицировать 2-процентным раствором лизола, 5-процентным раствором карболовой кислоты или 1-промилле раствором сулемы после работы с инфекционным материалом и перед использованием полотенец.

3. Ни в коем случае нельзя использовать лабораторные полотенца или тряпки для вытирания инфекционного материала; если такие полотенца или тряпки загрязнились, их необходимо немедленно стерилизовать кипячением.

4. Для сбора любых отходов предусмотрены специальные ведра с дезинфицирующим средством, и ничего нельзя бросать на пол.

5. Все инструменты должны подвергаться обжигу, кипячению или иной дезинфекции сразу после использования.

6. Этикетки необходимо смачивать водой, а не ртом.

7. Все использованные покровные стекла, предметные стекла и пипетки после работы с инфекционным материалом и т. д. должны помещаться в 2-процентный раствор лизола. Для этой цели на каждом рабочем столе имеется сосуд.

8. Все чашечные и пробирочные культуры патогенных организмов после использования должны помещаться для немедленной дезинфекции в коробки, предусмотренные для этой цели.

9. Никакие жидкости не должны сливаться в раковины или канализацию, если они предварительно не были продезинфицированы.

10. Животных следует вскрывать только после того, как они прибиты к деревянным доскам, а их кожа тщательно промыта дезинфицирующим раствором.

11. Сразу после завершения патологоанатомического вскрытия каждый труп должен быть помещен в цинковый ящик для животных — не снимая тушу с доски для вскрытия — и крышка ящика должна быть закрыта, готовая к отправке в крематорий.

12. Мертвые животные после использования кремируются в крематории, и лабораторный служитель должен быть уведомлен, когда тела готовы к кремации.

13. Никому из работников лаборатории не разрешается входить в помещения для животных без сопровождения специального ответственного служителя, который должен неукоснительно соблюдать те же указания относительно личной дезинфекции, что и работники лабораторий.

14. Никакие культуры не должны выноситься из лаборатории без разрешения заведующего отделением.

15. О всех несчастных случаях, таких как пролитие инфицированного материала, порезы или уколы пальцев, необходимо немедленно сообщать ответственному бактериологу.

II. СТЕКЛЯННАЯ АППАРАТУРА ОБЩЕГО ПОЛЬЗОВАНИЯ.

Оборудование бактериологической лаборатории, что касается стеклянной аппаратуры, мало чем отличается от оборудования химической лаборатории, и чистота аппаратуры столь же важна. Стеклянная посуда, включенная в следующий список, помимо чистоты, должна храниться в стерильном или свободном от микробов состоянии.

Пробирки. — Удобно иметь в запасе пробирки нескольких размеров для удовлетворения особых требований, а именно:

1. 18 × 1,5 см, для содержания сред при обычных пробирочных культурах.

2. 18 × 1,3 см, для содержания сред, используемых для заливки чашечных культур, а также для хранения стерильных «тампонов».

3. 18 × 2 см, для содержания клиньев картофеля, свеклы или других растительных сред.

4. 13 × 1,5 см, для содержания свернутой сыворотки крови.

Пробирки должны быть изготовлены из лучшего немецкого калиевого стекла, «синелинейного», прочного и тяжелого, с краем отверстия пробирки, слегка отогнутым, но не до такой степени, чтобы образовался выраженный ободок. (Стоимость около 1,50 доллара или 6 шиллингов за гросс.) Такие пробирки, правда, дороги, но они достаточно прочны, чтобы выдерживать грубое обращение, обычно не разбиваются, если их случайно уронить (момент, имеющий значение при работе с культурами патогенных бактерий), их можно чистить, стерилизовать и использовать снова и снова, и благодаря длительному сроку службы они полностью оправдывают свои первоначальные затраты.

Следует отметить, что производители редко выпускают такие пробирки абсолютно одинакового калибра, и партия пробирок 18 на 1,5 см обычно содержит такие крайние размеры, как 18 на 2 см и 18 на 1,3 см. Следовательно, если для сравнения хранить набор стандартных пробирок или использовать штангенциркуль, каждую новую поставку так называемых пробирок 18 на 1,5 см можно легко рассортировать по этим трем размерам, что упростит заказ.

5. 5 × 0,7 см, для использования в перевернутом положении внутри пробирок, содержащих углеводные среды, в качестве газосборных трубок.

Эти пробирки, «без ободка», могут быть из обычного тонкого стекла, так как менее двух процентов из них пригодны для использования во второй раз.

Fig. 1.—Bohemian flask.

Fig. 2.—Pear-shaped flask.

Fig. 3.—Erlenmeyer flask (narrow neck).

Богемские колбы (рис. 1). — Это обычные колбы химической лаборатории. Следует иметь в наличии хороший ассортимент емкостью от 250 до 3000 куб. см. Модифицированная форма, известная как «грушевидная» (рис. 2), предпочтительнее для меньших размеров, т. е. 250 и 500 куб. см.

Колбы Эрленмейера (рис. 3). — Колбы Эрленмейера емкостью 75, 100 и 250 куб. см чрезвычайно полезны. Для использования в качестве культуральных колб следует выбирать только те, которые имеют узкое горлышко длиной около 2 см.

Культуральные колбы Колле (рис. 4). — Эти тонкие плоские колбы (для содержания агара или желатина, который застывает слоем на одной стороне) чрезвычайно полезны из-за большой питательной поверхности, доступной для роста. Поверхностная культура в одной из них даст столько же роста, сколько десять или двенадцать «скошенных» пробирочных культур. Широкое горлышко, однако, является недостатком, и для многих целей предпочтительнее тонкие плоские культуральные бутыли, известные как бутыли Ру (рис. 5).

Fig. 4.—Kolle's culture flask.

Fig. 5.—Roux's culture bottle.

Fig. 6.—Guy's culture bottle.

Fig. 7.—Filter flask.

Еще более удобным является образец, используемый в лаборатории автора (рис. 6), так как благодаря большей глубине среды, которую можно получить в этих колбах, возможен чрезвычайно пышный рост; узкое горлышко сводит к минимуму вероятность случайного загрязнения, а общая форма позволяет ставить колбы одну на другую.

Фильтр-колбы или сывороточные колбы Китасато (рис. 7). — Различные размеры, емкостью от 250 до 2000 куб. см. Они должны быть из прочного стекла, чтобы выдерживать давление, которому они подвергаются, но в то же время должны быть тщательно отожжены, чтобы выдержать температуру, необходимую для стерилизации.

Все колбы должны быть либо из йенского стекла, либо из почти столь же известного стекла Resistance или R, при этом дополнительные первоначальные затраты оправдываются относительной устойчивостью стекла к поломкам.

Чашки Петри или «чашки» (рис. 8, а). — Они теперь полностью заменили прямоугольные листы стекла, введенные Кохом для пластинчатого метода культивирования. Каждая «чашка» состоит из пары круглых стеклянных дисков с резко загнутыми краями, образующих таким образом неглубокие чашки, одна из которых имеет чуть больший диаметр, чем другая, и поэтому в перевернутом виде образует крышку или колпачок для меньшей. Чашки с внешним диаметром 10 см и высотой 1,5 см являются наиболее общеупотребительными. Партия из восемнадцати таких чашек стерилизуется и хранится в цилиндрической медной коробке (30 см высотой и 12 см диаметром), снабженной «съемной» крышкой. Внутри каждой коробки находится медная скоба с круглым дном, на которой покоятся чашки и с помощью которой каждую из них можно по очереди поднимать к отверстию коробки (рис. 9) для извлечения.

Капсулы (рис. 8, b и c). — Это чашки Петри меньшего диаметра, но большей глубины, чем те, что называются чашками. Особенно полезны будут два размера, а именно: 4 см в диаметре и 2 см в высоту, емкостью около 14 куб. см; и 5 см в диаметре и 2 см в высоту, емкостью около 25 куб. см. Они хранятся в медных цилиндрах аналогичной конструкции, что и для чашек, но размером 20 на 6 см и 20 на 7 см соответственно.

Градуированные пипетки. — Требуется несколько разновидностей, а именно:

1. Пипетки емкостью 1 куб. см, градуированные по 0,1 куб. см.

2. Пипетки емкостью 1 куб. см, градуированные по 0,01 куб. см (рис. 10, а).

Fig. 8.—Petri dish (a), and capsules (b, c).

Fig. 9.—Plate box with stirrup.

3. Пипетки емкостью 10 куб. см, градуированные по 0,1 куб. см (рис. 10, b).

Они должны быть около 30 см в длину (1 и 2 с довольно узким каналом), градуированы до самого кончика и иметь по крайней мере 10 см свободного пространства между первым делением и верхним концом; открытое горлышко должно быть закупорено ватой. Каждая разновидность должна быть стерилизована и храниться в отдельном цилиндрическом медном футляре размером около 36 на 6 см со «съемной» крышкой, на которой четкими цифрами проштампована емкость содержащихся пипеток.

Fig. 10.—Measuring pipettes, a and b.

Лаборатория также должна быть обеспечена полным набором «стандартных» градуированных пипеток, каждая из которых в наборе проштампована и подтверждена сертификатом одной из признанных лабораторий физических измерений, таких как Шарлоттенбург. Эти инструменты дороги и должны быть зарезервированы исключительно для стандартизации пипеток, находящихся в обычном использовании, и для калибровки небольших пипеток, изготовленных в лаборатории. Такой набор должен включать, по крайней мере, пипетки, дозирующие 10, 5, 2,5, 2, 1, 0,5, 0,25, 0,2, 0,1, 0,05 и 0,01 куб. см соответственно.

В непосредственно следующих разделах описаны небольшие предметы стеклянной аппаратуры, которые следует изготавливать в лаборатории из стеклянных трубок различных размеров. При их подготовке необходимы три предмета: во-первых, трехгранный напильник из твердой стали или, предпочтительно, нож стеклодува из твердой тюрингской стали для резки стеклянных трубок и т. д.; во-вторых, паяльная лампа, так как, хотя многое можно сделать с помощью обычной горелки Бунзена, пламя паяльной лампы способствует быстрой работе; и, наконец, горелка типа «крыло летучей мыши».

Fig. 11.—Glass-cutting knife. a. handle. b. double edged blade. c. shaft. d. locking nut. e. spanner for nut.

1. Нож для резки стекла. Этот предмет продается в двух формах: настольный нож (рис. 11) и перочинный нож. Первый снабжен лезвием длиной около 8 см и имеет две режущие кромки. Режущая кромка при рассмотрении при сильном освещении оказывается состоящей из мелких, близко расположенных зубцов, подобных тем, что на пиле. Нож следует поддерживать острым путем частой правки на песчаниковом бруске. Перочинная форма, общей длиной около 6 см, состоит из небольшого пружинного лезвия с одной режущей кромкой, установленного в рукоятке, как обычный перочинный нож.

2. Для реального удобства работы паяльная лампа должна быть установлена на специальном столе, соединенном с цилиндрическими мехами, приводимыми в действие педалью. Тот, что изображен на рисунке (рис. 12), изготовлен путем установки тиковой столешницы размером 60 см на стойки закрытых мехов двойного действия (Энфера) и снабжен газовой паяльной лампой Флетчера.

3. Обычная газовая горелка типа «крыло летучей мыши», установленная в дальнем углу столешницы, неоценима при подготовке трубчатой аппаратуры с крутыми изгибами, а также для покрытия только что изготовленной стеклянной аппаратуры слоем сажи, чтобы предотвратить слишком быстрое охлаждение и его обычно связанный результат — растрескивание.

Fig. 12.—Glass blower's table with Enfer's foot bellows.

6. Седиментационные пробирки 5×0,5 см для реакций осаждения и т. д., а также для содержания небольших количеств жидкости, подлежащей центрифугированию в гематокрите. Они изготавливаются путем взятия 14-сантиметровых отрезков прочной стеклянной трубки требуемого диаметра и нагревания центра в пламени горелки Бунзена или паяльной лампы. Когда центральная часть станет совсем мягкой, быстро разведите концы в стороны, а затем округлите заостренные концы двух таким образом сформированных пробирок. С помощью ножа для резки стекла отрежьте все необходимое с открытых концов, чтобы придать пробиркам требуемую длину.

Прямоугольный блок из «пластилина» (моделирующей глины), в который можно воткнуть конические концы, представляет собой очень удобную подставку для этих маленьких пробирок.

Капиллярные пипетки или пипетки Пастера (рис. 13 а). — Эти маленькие инструменты неоценимы, и их следует иметь в хорошем запасе. Они изготавливаются из трубок мягкого стекла различного калибра (наиболее общеупотребительный размер — 8 мм в диаметре) следующим образом: удерживайте 10-сантиметровый отрезок стеклянной трубки за оба конца и, вращая его, нагревайте центральную часть в пламени горелки Бунзена или паяльной лампы до тех пор, пока стекло не станет красным и мягким. Теперь выньте его из пламени и равномерно разведите концы в стороны, вытягивая таким образом нагретую часть в просторную капиллярную трубку; сломайте капиллярную часть посередине, запаяйте сломанные концы в пламени и округлите края открытого конца каждой пипетки. Свободная ватная пробка в открытом горлышке завершает капиллярную пипетку. После того как их будет подготовлено несколько штук, их стерилизуют и хранят партиями либо в металлических футлярах, подобных тем, что используются для градуированных пипеток, либо в пробирках большого размера — запаянными концами вниз, а закупоренными концами к отверстию футляра.

Fig. 13.—Capillary pipettes. a, b, c.

Наполнение и опорожнение капиллярной пипетки наиболее удовлетворительно осуществляется путем надевания небольшого резинового баллончика (подобного тому, что на детской бутылочке для кормления, но не перфорированного) на верхний конец после отрезания или отламывания запаянного кончика капиллярной части. Если теперь надавить пальцем и большим пальцем на эластичный баллончик, пока капиллярный конец находится под поверхностью жидкости, которую нужно набрать, часть содержащегося воздуха будет вытеснена, а последующее ослабление этого давления (приводящее к образованию частичного вакуума) заставит жидкость подняться по капиллярной трубке. Последующее сжатие баллончика естественным образом приведет к полному вытеснению жидкости из пипетки (рис. 14).

Fig. 14.—Filling the capillary teat-pipette.

Модификация этой пипетки, в которой сужение или короткий отрезок капиллярной трубки введен чуть ниже закупоренного горлышка (рис. 13, b), также окажется чрезвычайно полезной при сборе и хранении патологических экссудатов.

Третья форма, где капиллярная часть имеет длину около 4 или 5 см и составляет лишь малую часть всей длины пипетки (рис. 13, c), также окажется полезной.

«Кровяные» пипетки (рис. 15). — Следует также подготовить специальные пипетки для сбора довольно больших количеств крови (как предложено Пейксом). Они изготавливаются из трубок мягкого стекла диаметром 1 см аналогично пипеткам Пастера, за исключением того, что необходимо использовать кончик пламени паяльной лампы, чтобы получить резкий «плечико» на обоих концах центрального баллона. Терминальные трубки должны сохранять диаметр не менее 1 мм, чтобы избежать капиллярного действия во время сбора жидкости.

Fig. 15.—Blood pipettes and hair-lip pin in a test-tube.

Fig. 16.—Blood-pipette in metal thermometer case.

Для стерилизации и хранения каждая пипетка помещается внутрь пробирки, опираясь на ватный тампон, и пробирка закупоривается обычным способом. Поскольку эти трубки используются почти исключительно для работы с кровью, принято помещать внутрь пробирки ланцетовидную булавку для заячьей губы или плоскую иглу Хагедорна № 9, чтобы весь комплект можно было стерилизовать за один раз.

Для сбора небольших количеств крови для реакций агглютинации и тому подобного многие предпочитают короткий прямой отрезок узкой стеклянной трубки, вытянутый на обоих концах до почти капиллярных размеров. Такие пипетки общей длиной около 8 см наиболее удобно стерилизовать в обычных металлических футлярах для термометров (рис. 16).

Градуированные капиллярные пипетки (рис. 17). — Их также следует изготавливать в лаборатории — из манометрических трубок — простой, удобной формы и градуировать с помощью «стандартных» пипеток (в сотых долях) для содержания таких количеств, как 10, 50 и 90 куб. мм, и тщательно помечать алмазом для письма. Они, предварительно стерилизованные в больших пробирках, окажутся чрезвычайно полезными при приготовлении точных процентных растворов, когда доступны лишь мельчайшие количества жидкости.

Fig. 17.—Capillary graduated pipettes.

Автоматические («дроссельные») пипетки. — Эти остроумные пипетки, введенные Райтом, могут быть легко откалиброваны в лаборатории и чрезвычайно полезны для градуировки небольших пипеток, для измерения малых количеств жидкостей, при приготовлении разведений сыворотки для реакций агглютинации и т. д. Обычно они изготавливаются из капиллярных пипеток Пастера (рис. 13, а). Следующее описание изготовления пипетки на 5 куб. мм послужит примером того, как калибруются небольшие автоматические пипетки.

1. Выберите пипетку, капиллярная часть которой имеет довольно просторный канал и обладает ровными стенками, и удалите ватную пробку из открытого конца.

2. Нагрейте капиллярную часть возле свободного конца в пламени байпаса горелки Бунзена и вытяните ее в очень тонкую, волосовидную трубку и сломайте ее. Этот волосовидный кончик позволит проходить воздуху, но слишком тонок для прохождения металлической ртути.

3. С помощью стандартной градуированной пипетки отмерьте 5 куб. мм чистой ртути в верхнюю широкую часть пипетки.

4. Прикрепите резиновый баллончик к пипетке и, надавливая на него, постепенно загоняйте ртуть неразрывным столбиком вниз по капиллярной трубке, пока она не остановится у нитевидного кончика.

5. Отрежьте капиллярную трубку точно на верхнем уровне столбика ртути, переверните ее и дайте ртути вытечь.

6. Отломите остаток капиллярной трубки от широкой верхней части пипетки, которая теперь предназначена для формирования покрывающей трубки или воздушной камеры, или того, что мы можем назвать «стволом». Этот ствол теперь имеет нижний конец в форме усеченного конуса, а верхний конец обрезан под прямым углом. Снимите баллончик.

7. Введите капиллярную трубку в этот ствол нитевидным кончиком вверх, а обрезанный под прямым углом конец должен выступать примерно на 0,5 см за сужающийся конец ствола.

Fig. 18.—Throttle pipette—small capacity.

8. Бросьте небольшой кусочек сургуча в ствол сбоку от капиллярной трубки, а затем нагрейте трубку в газовом пламени до тех пор, пока воск не размягчится и не создаст воздухонепроницаемое соединение между капиллярной трубкой и концом ствола.

9. Наденьте резиновый баллончик на открытый конец ствола и таким образом завершите пипетку, на которую можно положиться, что она всегда будет всасывать и доставлять ровно 5 куб. мм жидкости.

Небольшая модификация этой процедуры необходима при изготовлении трубок для измерения объемов, превышающих, скажем, 75 куб. мм. Так, чтобы сделать дроссельную пипетку для измерения 100 куб. мм:

1. Возьмите короткий отрезок трубки и вытяните один конец в просторный капиллярный стержень, а затем снова вытяните кончик в тонкую волосовидную точку, сформировав таким образом небольшую пипетку Пастера с волосовидным капиллярным кончиком.

2. С помощью стандартной пипетки отмерьте 100 куб. мм в горлышко этой пипетки и сделайте царапину алмазом для письма на верхнем уровне (a) ртутного мениска (рис. 19, A).

Fig. 19.—Making throttle pipettes—large capacity

Теперь протолкните ртуть вниз в капиллярный стержень настолько, насколько это возможно, чтобы оставить верхнюю часть трубки в области алмазной царапины пустой (рис. 19, B).

3. Нагрейте трубку в области алмазной царапины в пламени паяльной лампы и, вынув трубку из пламени, вытяните ее так, чтобы алмазная царапина теперь занимала положение где-то около центра этой новой капиллярной части (рис. 19, C).

4. Нагрейте трубку в этом положении в пламени горелки Бунзена и вытяните ее в волосовидный кончик. Отломите стеклянную трубку, оставив около 5 мм волосовидного кончика, прикрепленного к верхней капиллярной части (рис. 19, D). Дайте стеклу остыть.

5. Поднимите баллон за длинный капиллярный стержень и дайте ртути вернуться в исходное положение — операция, которая будет облегчена отламыванием волосовидного кончика от длинного куска капиллярной трубки.

6. Отметьте на капиллярном стержне жирным карандашом положение конца столбика ртути (рис. 19, E).

7. Нагрейте капиллярную трубку в этом месте в пламени горелки Бунзена и вытяните ее совсем немного, чтобы при разрезании в этом положении получился заостренный кончик.

8. С помощью ножа для резки стекла разрежьте капиллярную трубку в точке «b» и дайте ртути вытечь.

9. Теперь нанесите толстый слой сургуча на горлышко баллона.

10. Возьмите кусок стеклянной трубки с каналом 5 мм и вытяните его, как если бы вы делали обычную пипетку Пастера.

11. Отломите капиллярную часть так, чтобы оставить покрывающую трубку, подобную той, что уже использовалась для меньших градуированных пипеток. В эту покрывающую трубку опустите градуированный баллон и протащите капиллярный стержень вниз через конический кончик, пока дальнейшее продвижение не будет остановлено слоем сургуча.

12. Нагрейте пипетку в газовом пламени, чтобы расплавить сургуч и создать воздухонепроницаемое соединение.

13. Наденьте резиновый баллончик на открытый конец покрывающей трубки, и автоматическая пипетка готова к использованию (рис. 19, F).

Седиментационные пипетки (рис. 20). — Они изготавливаются из 10-сантиметровых отрезков узкой стеклянной трубки путем запаивания одного конца, выдувания небольшого баллона в центре и закупоривания открытого конца ватой; после стерилизации открытый конец снабжается коротким куском резиновой трубки и стеклянным мундштуком. Когда необходимо наблюдать реакции осаждения в очень малых количествах жидкости, эти трубки окажутся гораздо удобнее, чем упомянутые ранее пробирки 5 на 0,5 см.

Fig. 20.—Sedimentation pipette.

Пипетки Пастера, снабженные резиновыми баллончиками, также окажутся полезными для седиментационных тестов при работе с мельчайшими количествами сыворотки и т. д.

Fig. 21.—Fermentation tubes.

Ферментационные трубки (рис. 21). — Они используются для сбора и анализа газов, выделяющихся из сред во время роста некоторых разновидностей бактерий, и могут быть либо простыми (а), либо градуированными (b). Простая форма (рис. 21, c) может быть изготовлена из 14-сантиметровых отрезков трубки мягкого стекла диаметром 1,5 см. Пламя горелки Бунзена прикладывается к точке на расстоянии около 5 см от одного конца такого куска трубки, и трубка слегка вытягивается, образуя сужение; суженная часть сгибается в пламени горелки типа «крыло летучей мыши» под острым углом, а открытый конец длинного плеча запаивается в пламени паяльной лампы. Открытый конец короткого плеча округляется, а затем закупоривается ватой, и трубка готова к стерилизации.

ОЧИСТКА СТЕКЛЯННОЙ АППАРАТУРЫ.

Вся стеклянная посуда, используемая в бактериологической лаборатории, должна быть тщательно очищена перед использованием, и это правило относится как к новой, так и к старой аппаратуре, хотя используемые методы могут незначительно различаться.

Для очистки новых пробирок. —

1. Поместите пробирки в ведро или другую удобную емкость, наполните водой и добавьте горсть «Сапона» или другого мыльного порошка. Убедитесь, что пробирки полны и погружены в воду.

2. Поставьте ведро над большим пламенем горелки Бунзена и кипятите в течение тридцати минут — или кипятите в автоклаве в течение аналогичного периода времени.

3. Очистите внутреннюю часть пробирок с помощью щеток для пробирок и тщательно промойте в холодной воде.

4. Переверните пробирки и дайте им полностью стечь.

5. Высушите пробирки и отполируйте стекло внутри и снаружи мягкой тканью, такой как селвит.

Новые колбы, чашки и капсулы должны быть очищены аналогичным образом.

Для очистки новых градуированных пипеток. —

1. Поместите пипетки в удобную емкость, наполненную водой, в которую добавлен мыльный порошок.

2. Энергично кипятите воду в течение двадцати минут над пламенем горелки Бунзена.

3. Промойте пипетки в проточной воде и дайте стечь.

4. Пропустите дистиллированную воду через пипетки и дайте стечь.

5. Пропустите ректификованный спирт через пипетку и дайте стечь как можно полнее.

6. Поместите пипетки в сушильный шкаф (см. стр. 31), закройте дверцу, откройте вентиляционную заслонку и медленно поднимите температуру примерно до 80° C. Выключите газ и дайте шкафу остыть.

Или 6а. Присоединяйте каждую пипетку по очереди к резиновой трубке ножных мехов или воздушного потока паяльной лампы и продувайте воздух через пипетку, пока внутренняя часть не станет сухой.

Стеклянная посуда, которая уже была в употреблении, считается инфицированной и обрабатывается немного иначе.

Инфицированные пробирки. —

1. Упакуйте пробирки в проволочную корзину автоклава (предварительно удалив ватные пробки, колпачки и т. д.) в вертикальном положении, и перед тем, как заменить корзину, убедитесь, что на дне котла достаточно воды. Теперь прикрепите кусок резиновой трубки к ближайшему водопроводному крану и с его помощью наполните каждую пробирку водой.

2. Полностью продезинфицируйте, подвергнув пробирки и т. д. воздействию температуры 120° C в течение двадцати минут (см. стр. 37).

(Если автоклав недоступен, пробирки необходимо поместить в дигестор или даже в большую кастрюлю или ведро с плотно прилегающей крышкой и энергично кипятить в течение тридцати-сорока пяти минут для обеспечения дезинфекции.)

3. Пока они еще горячие, опорожните каждую пробирку по очереди и грубо очистите ее внутреннюю часть жесткой щеткой для пробирок.

4. Поместите пробирки в ведро или другую удобную емкость, наполните водой и добавьте горсть «Сапона» или другого мыльного порошка. Убедитесь, что пробирки полны и погружены в воду.

5. Поставьте ведро над большим пламенем горелки Бунзена и кипятите в течение тридцати минут.

6. Очистите внутреннюю часть пробирок с помощью щеток для пробирок и тщательно промойте в холодной воде.

7. Слейте воду и погрузите пробирки в большую банку, содержащую воду, подкисленную 2–5-процентной соляной кислотой. Оставьте их там примерно на пятнадцать минут.

8. Выньте из банки с кислотой, дайте стечь, тщательно промойте в проточной воде, затем дистиллированной водой.

9. Переверните пробирки и дайте им полностью стечь.

Высушите пробирки и отполируйте стекло внутри и снаружи мягкой тканью, такой как селвит.

Инфицированные колбы, чашки и капсулы должны обрабатываться аналогичным образом.

Колбы, которые использовались только при приготовлении сред, должны быть очищены сразу после окончания работы с ними. Наполните каждую колбу водой, в которую добавлены мыльный порошок и несколько кристаллов перманганата калия, и дайте прокипеть над открытым пламенем. Внутреннюю часть колбы обычно можно идеально очистить с помощью щетки для колб, но в некоторых случаях необходимо взболтать внутри колбы воду, подкисленную 5-процентной азотной кислотой, или большой ватный тампон, предварительно обвалянный в серебряном песке, после чего тщательно промыть чистой водой, высушить и отполировать.

Инфицированные пипетки. —

1. Погружайте инфицированные пипетки сразу после использования в высокие стеклянные цилиндры, содержащие 2-процентный раствор лизола, и оставляйте их там на несколько дней.

2. Выньте из банки и дайте стечь. Кипятите в воде, в которую добавлено немного мыла, в течение тридцати минут.

3. Тщательно промойте в холодной воде.

4. Погрузите в 5-процентную азотную кислоту на час или два.

5. Снова промойте в проточной воде, чтобы удалить все следы кислоты.

6. Завершите очистку, как описано в разделе «новые пипетки».

При работе с градуированными капиллярными пипетками, используемыми для работы с кровью или сывороткой (новыми или инфицированными), много времени уходит на различные этапы, начиная с 5-го, и процесс очистки можно существенно ускорить, если применить следующее устройство.

Присоедините фильтр-колбу Китасато большого размера к всасывающему насосу Шпренгеля или воздушному насосу Герика (см. стр. 43). К боковому тубусу фильтр-колбы прикрепите 20-сантиметровый отрезок резиновой напорной трубки, имеющей канал, достаточно большой, чтобы вместить концы пипеток.

Затем наполните небольшой стакан дистиллированной водой. Присоедините первую пипетку к свободному концу резиновой трубки, поместите кончик пипетки вниз в стакан с водой и запустите насос (рис. 22).

Fig. 22.—Cleaning blood pipettes.

Когда вся вода будет аспирирована через пипетку в фильтр-колбу, наполните стакан ректификованным спиртом, а когда он закончится, снова наполните эфиром. Отсоедините пипетку и высушите в сушильном шкафу.

Предметные и покровные стекла (рис. 23) при первой покупке имеют «жирные» поверхности, на которых вода собирается в мельчайшие капли и эффективно препятствует растеканию тонких, ровных пленок.

Микроскопические предметные стекла. — Предметные стекла общего пользования — это те, что известны как «три на один» (размером 3 дюйма на 1 дюйм, или 76 на 26 мм), и должны быть из хорошего белого кронгласа, с матовыми краями.

Новые предметные стекла следует оставить в спирте, подкисленном 5-процентной соляной кислотой, на несколько часов, промыть в проточной воде, грубо обсушить на полотенце, высушить и, наконец, отполировать тканью селвит.

Fig. 23.—Slides and cover-slips, actual size.

Если для немедленного использования требуется лишь несколько предметных стекол, хороший способ — протереть поверхность ювелирной наждачной бумагой (Hubert's 00). Кусок твердого дерева размером 76×26×26 мм с приклеенным к нему куском этой наждачной бумаги является чрезвычайно полезным предметом на столе микроскописта.

Покровные стекла. Наиболее удобными размерами являются квадраты 19 мм для обычных мазков на покровных стеклах и прямоугольники 38 на 19 мм для мазков крови и серийных срезов; оба вида должны быть толщиной «№ 1», которая варьируется от 0,15 до 0,22 мм, чтобы их можно было использовать с иммерсионными объективами большой мощности.

Покровные стекла следует очищать следующим образом:

1. Опускайте покровные стекла по одному в эмалированную железную емкость или высокий стеклянный стакан, содержащий 10-процентный раствор хромовой кислоты.

2. Нагрейте на пламени горелки Бунзена и дайте кислоте слабо кипеть в течение двадцати минут.

Примечание. В стакан можно положить несколько кусочков глиняной трубки или пемзы, чтобы предотвратить «разбрызгивание» хромовой кислоты.

3. Переложите покровные стекла в плоскую стеклянную чашку и промывайте под проточной водой из-под крана, пока не исчезнут все следы желтого цвета. Во время промывки поддерживайте движение покровных стекол, придавая чашке вращательное движение.

4. Промойте дистиллированной водой аналогичным образом.

5. Промойте ректификованным спиртом.

6. Перенесите покровные стекла с помощью чистых пинцетов, предварительно прокаленных в пламени горелки Бунзена для удаления следов жира, в небольшой стакан с абсолютным спиртом.

Слейте спирт и перенесите покровные стекла с помощью пинцета в стеклянную банку с широким горлышком, содержащую абсолютный спирт, в котором они будут храниться, и плотно закройте пробкой.

Примечание. После того как покровные стекла были помещены в хромовую кислоту, к ним ни в коем случае нельзя прикасаться пальцами.

Использованные предметные и покровные стекла. Использованные предметные стекла с препаратами под покровным стеклом, а также покровные стекла, использованные для препаратов «висячая капля», при утилизации следует бросать в емкость, содержащую 2-процентный раствор лизола.

После выдерживания в нем в течение недели или около того даже покровные стекла, смонтированные на канадском бальзаме, можно легко отделить от предметных стекол.

Предметные стекла. —

1. Тщательно промойте предметные стекла в проточной воде.

2. Кипятите предметные стекла в воде с добавлением «сапона» в течение получаса.

3. Тщательно ополосните в холодной воде.

4. Высушите и отполируйте сухой тканью.

Покровные стекла. —

1. Тщательно промойте покровные стекла в проточной воде.

2. Прокипятите покровные стекла в 10-процентном растворе хромовой кислоты, как для новых покровных стекол.

3. Тщательно промойте в проточной воде.

4. Отберите те покровные стекла, на которых осталось много грязи, и потрите их между большим и указательным пальцами под струей воды из-под крана. Грязь обычно легко стирается, так как она стала хрупкой от контакта с хромовой кислотой.

5. Верните все покровные стекла в стакан, залейте свежим раствором хромовой кислоты и обработайте как новые покровные стекла.

Примечание. Пробирки, чашки, капсулы и т. д., которые от длительного использования стали поцарапанными и мутными или которые невозможно очистить иным способом, можно обработать, погрузив их на десять минут в эмалированную железную ванну, содержащую воду, подкисленную до 1 процента плавиковой кислотой, затем тщательно промыть водой, высушить и отполировать.

ЗАКУПОРКА ПРОБИРОК И КОЛБ.

Перед стерилизацией все пробирки и колбы должны быть тщательно закупорены ватой; для этой цели следует использовать лучшую гигроскопическую вату (предпочтительно ту, которая выпускается в цилиндрических фунтовых упаковках и проложена папиросной бумагой — так называемая хирургическая вата).

1. Для пробирки или небольшой колбы оторвите от рулона полоску ваты размером около 10 см в длину и 2 см в ширину.

2. Аккуратно подогните края и слегка скатайте полоску ваты между большими и указательными пальцами обеих рук, чтобы сформировать длинный цилиндр.

3. Сложите его пополам и вставьте получившийся закругленный конец в открытое горлышко пробирки или колбы.

4. Теперь, придерживая вату между большим и указательными пальцами правой руки, вращайте пробирку пальцами левой руки и постепенно ввинчивайте ватную пробку в горлышко на глубину около 2,5 см, оставляя примерно такую же длину ваты снаружи.

Fig 24..—Plugging test-tubes: a, cylinder of wool being rolled; b, cylinder of wool being doubled; c, cylinder of wool being inserted in tube.

Пробка должна быть плотной и довольно туго входить в пробирку или колбу, достаточно туго, чтобы выдержать вес стекла вместе с объемом среды, который сосуд должен содержать, но не настолько туго, чтобы ее нельзя было легко извлечь вращательным движением, захватив между четвертым или третьим и четвертым пальцами и ладонью.

Для большой колбы необходимо взять аналогичную, но более крупную полоску ваты; метод изготовления и вставки пробки идентичен.

III. МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ.

СТЕРИЛИЗУЮЩИЕ АГЕНТЫ.

Стерилизация, т. е. удаление или уничтожение микроорганизмов, может быть осуществлена с помощью различных агентов. Применительно к практическим требованиям бактериологической лаборатории многие из этих агентов, такие как электричество, солнечный свет и т. д., малоценны, другие ограничены в своем применении; третьи же настолько хорошо подходят для конкретных целей, что их использование почти полностью ограничивается ими.

Наиболее часто используемые стерилизующие агенты:

Химические реагенты. — Дезинфицирующие средства (для дезинфекции стеклянной и металлической аппаратуры и патологических тканей).

Физические агенты. Тепло. — (а) Сухой жар:

1. Открытое пламя (для стерилизации платиновых игл и т. д.).

2. Муфельная печь (для стерилизации фильтрующих свечей и для уничтожения патологических тканей).

3. Горячий воздух (для стерилизации всей стеклянной посуды и металлической аппаратуры).

(б) Влажное тепло:

1. Вода при 56° C (для стерилизации некоторых альбуминовых жидкостей).

2. Вода при 100° C (для стерилизации хирургических инструментов, резиновых трубок, пробок и т. д.).

3. Текучий пар при 100° C (для стерилизации сред).

4. Перегретый пар при 115° C или 120° C (для дезинфекции загрязненных предметов и уничтожения старых культур бактерий).

Фильтрация. —

1. Ватные фильтры (для стерилизации воздуха и газов).

2. Фарфоровые фильтры (для стерилизации различных жидкостей).

МЕТОДЫ ПРИМЕНЕНИЯ.

Химические реагенты, такие как антисептики (т. е. вещества, которые подавляют рост, но не уничтожают бактериальную жизнь), очевидно, бесполезны. Дезинфицирующие средства или гермициды (т. е. вещества, которые уничтожают бактериальную жизнь), с другой стороны, ценны при дезинфекции патологического материала, а также различных частей аппаратуры, таких как пипетки, до их очистки и полной стерилизации другими процессами. К этому классу (в порядке общей полезности) относятся:

Lysol, 2 per cent. solution;

Perchloride of mercury, 0.1 per cent. solution;

Carbolic acid, 5 per cent. solution;

Absolute alcohol;

Ether;

Chloroform;

Camphor;

Thymol;

Toluol;

Volatile oils, such as oil of mustard, oil of garlic.

Формальдегид является мощным гермицидом, но его проникающий пар ограничивает его использование. Эти дезинфицирующие средства мало используются при окончательной стерилизации аппаратуры, главным образом из-за трудности их полного удаления, поскольку присутствие даже следов этих химикатов достаточно для того, чтобы подавить или изменить рост бактерий, что делает недействительными последующие эксперименты, проводимые с помощью аппаратуры, стерилизованной таким образом.

Примечание. Пробирки, колбы, фильтровальные колбы, пипетки, стеклянные трубки и т. д. в экстренных случаях можно быстро стерилизовать, промыв их по очереди дистиллированной водой, раствором сулемы, спиртом и эфиром, просушив и, наконец, осторожно нагрев над газовым пламенем, чтобы полностью удалить пары эфира. Хлороформ или другие летучие дезинфицирующие средства могут быть добавлены к различным жидкостям для уничтожения содержащихся в них бактерий, и когда это сделано, их можно полностью удалить из жидкости путем осторожного нагревания.

Сухой жар. — Открытое пламя горелки Бунзена неизменно используется для стерилизации платиновых игл (которые нагреваются докрасна) и может применяться для стерилизации кончиков пинцетов или других мелких инструментов, покровных стекол, пипеток и т. д., при этом достаточно очень короткого воздействия этого тепла.

Эфирное пламя. — В экстренных случаях мелкие инструменты, иглы и т. д. можно стерилизовать, окунув их в эфир, а после извлечения поджечь прилипшую жидкость и дать ей выгореть с поверхности инструментов. Повторите процесс дважды. После этого можно с уверенностью считать, что обработанная таким образом аппаратура стерильна.

Fig. 25.—Muffle furnace.

Муфельная печь (рис. 25). — Хотя этот вид нагрева в основном используется для уничтожения трупов мелких инфицированных животных, патологических тканей и т. д., он также применяется для стерилизации фарфоровых фильтрующих свечей (см. стр. 42).

Фильтрующие свечи дезинфицируют сразу после использования путем кипячения в стакане с водой в течение пятнадцати-двадцати минут. Однако эта обработка оставляет мертвые тела бактерий на поверхности и блокирует поры фильтра.

Чтобы уничтожить органическое вещество и подготовить фильтрующую свечу к дальнейшему использованию, действуйте следующим образом:

1. Оберните каждую свечу куском асбестовой ткани, закрепите концы ткани несколькими витками медной проволоки и поместите внутрь муфеля (небольшой муфель размером 76×88×163 мм вместит, возможно, четыре небольшие фильтрующие свечи).

2. Зажгите газ и доведите содержимое муфеля до белого каления; поддерживайте эту температуру в течение пяти минут.

3. Погасите газ, и когда муфель полностью остынет, извлеките фильтрующие свечи и храните их (не снимая асбестовую обертку) в стерильных металлических коробках.

Примечание. Слишком быстрое охлаждение свечей, которое происходит, если их извлечь из муфеля до того, как он остынет до комнатной температуры, может привести к появлению микроскопических трещин и дефектов, которые эффективно уничтожат их эффективность.

Горячий воздух. — Горячий воздух при 150° C уничтожает все бактерии, споры и т. д. примерно за тридцать минут; кратковременное воздействие температуры от 175° до 180° C даст тот же результат и является более удобным методом стерилизации. Этот метод применим только к стеклянным и металлическим веществам, а также к небольшому количеству ваты, содержащейся в пробках пробирок и т. д. Большие массы ткани не стерилизуются эффективно сухим жаром — если не обугливать их, — так как его проникающая способность невелика.

Стерилизация горячим воздухом осуществляется в сушильном шкафу (рис. 18). Это прямоугольная металлическая коробка с двойными стенками, установленная на подставке и нагреваемая снизу большой горелкой Бунзена. Внутри шкафа имеются съемные полки, на которых размещаются предметы для стерилизации, либо по отдельности, либо упакованные в квадратные проволочные корзины или ящики, хранящиеся специально для этой цели. Одна из сторон навешена на петли, образуя дверцу. Центральная часть металлического дна, на которую направлено пламя Бунзена, вырезана и заменена огнеупорными кирпичными пластинами, которые вставляются в металлические пазы и легко заменяются при поломке или износе. Верхняя часть шкафа снабжена перфорированной вентиляционной заслонкой и двумя трубками: одна для установки ртутного термометра, градуированного до 200° или 250° C, другая для терморегулятора. Можно использовать обычный ртутный терморегулятор, но предпочтительнее использовать регулирующую капсулу типа Хирсона (см. стр. 219) с пружинным рычагом, прикрепленным к рычагу так, чтобы при достижении температуры кипения капсулы (например, 175° C) подача газа полностью прекращалась, и горелку нельзя было снова зажечь, пока пружинный рычаг не будет переустановлен вручную. Терморегулятор отнюдь не является необходимостью и может быть заменен термометром с большим диаметром канала и подвижным платиновым контактом, соединенным с электрическим звонком, который можно легко настроить на срабатывание при любой заданной температуре. Даже если стерилизатор оснащен капсульным регулятором, описанным выше, следует также установить контактный термометр.

Fig. 26.—Hot-air oven.

Использование сушильного шкафа. —

1. Поместите ящики с пробирками, металлические футляры с чашками и пипетками, незакрепленную аппаратуру и т. д. внутрь шкафа, следя за тем, чтобы ватные пробки не соприкасались со стенками, иначе тепло, передаваемое металлом, обуглит или даже подожжет их.

Чтобы подготовить проволочный ящик для пробирок и т. д., покройте дно слоем толстой асбестовой ткани; или возьмите немного асбестового волокна, смочите его небольшим количеством воды и замесите в пасту; нанесите пасту на дно ящика, втирая ее в ячейки и разглаживая поверхность пестиком. Когда несколько ящиков будут таким образом обработаны, поместите их внутрь сушильного шкафа, закройте дверцу, откройте вентиляционную заслонку, зажгите газ и поднимите температуру внутри до 160° C. Через десять минут погасите газ, откройте дверцу шкафа и дайте содержимому остыть. Асбест теперь образует гладкий, сухой, губчатый слой на дне, который прослужит много месяцев, прежде чем потребуется его обновление, и значительно уменьшит потери пробирок из-за поломок.

Медные цилиндры и большие пробирки, предназначенные для пипеток, подготавливаются аналогичным образом, чтобы защитить кончики этих предметов от повреждений.

2. Закройте дверцу шкафа и откройте вентиляционную заслонку, чтобы влага, оставшаяся в пробирках и т. д., могла выйти; зажгите газ внизу; установите электрический сигнал на срабатывание при 100° C.

3. Когда температура в шкафу достигнет 100° C, закройте вентиляционную заслонку; переустановите сигнал на срабатывание при 175° C.

4. Поднимите температуру до 175° C.

5. Немедленно погасите газ и дайте аппаратуре остыть.

6. Когда температура внутри, зафиксированная термометром, упадет до 60° C — но не раньше — дверцу можно открыть, а стерильные предметы извлечь и убрать на хранение.

Примечание. Пренебрежение этим предварительным охлаждением шкафа до 60° C приведет к многочисленным трещинам и поломкам пробирок.

После извлечения из шкафа ватные пробки, вероятно, будут слегка коричневого цвета.

Металлические инструменты, такие как ножи, ножницы и пинцеты, можно стерилизовать в сушильном шкафу, как описано выше, но воздействие 175° C может серьезно повлиять на закалку стали и, безусловно, затупит режущие кромки. Если, однако, желательно стерилизовать хирургические инструменты горячим воздухом, их следует упаковать в металлический ящик или ящики, нагреть до 130° C и выдержать при этой температуре около тридцати минут.

Влажное тепло. — Вода при 56° C. — Эта температура, если поддерживать ее в течение тридцати минут, достаточна для уничтожения вегетативных форм бактерий, но практически не влияет на споры. Ее использование ограничивается стерилизацией таких альбуминовых «жидких» сред, которые коагулируют при более высокой температуре.

Метод. —

1. Подготовьте водяную баню, нагреваемую пламенем горелки Бунзена, которое регулируется терморегулятором, так чтобы температура воды оставалась на уровне 56° C.

2. Погрузите пробирки или колбы с альбуминовой жидкостью в водяную баню так, чтобы верхний уровень этой жидкости был как минимум на 2 см ниже уровня воды. (Температура бани теперь немного упадет, но через несколько минут снова поднимется до 56° C).

3. После тридцати минут воздействия при 56° C погасите газ, извлеките пробирки или колбы из бани и подвергните их воздействию проточной воды, чтобы их содержимое быстро охладилось.

4. Поскольку вегетативные формы бактерий, присутствующие в жидкости, убиты, оставьте ее на двадцать четыре часа в прохладном темном месте; по истечении этого времени некоторые из спор, которые могут присутствовать, прорастут и примут вегетативную форму.

5. Уничтожьте эти новые вегетативные формы аналогичным воздействием при 56° C на второй день, в то время как другие, с более медленным прорастанием, могут быть уничтожены на третий день и так далее.

6. Чтобы обеспечить тщательную стерилизацию, повторяйте процесс в течение шести последовательных дней.

Этот метод воздействия на жидкости температурой 56° C на водяной бане в течение получаса в течение шести последовательных дней называется дробной стерилизацией.

Вода при 100° C уничтожает вегетативные формы бактерий почти мгновенно, а споры — за пять-пятнадцать минут. Этот метод стерилизации применим к металлическим инструментам, таким как ножи, пинцеты и т. д., используемым в экспериментах на животных; шприцам, резиновым пробкам, резиновым и стеклянным трубкам и другой мелкой аппаратуре, и осуществляется в том, что обычно называют «водяным стерилизатором» (рис. 27).