«Иммунитет при инфекционных заболеваниях»

[222]

Детальное исследование явлений, наблюдаемых у иммунизированных лягушек, выявило следующие факты. На самой ранней стадии бациллы, введенные в спинной лимфатический мешок, обнаруживались свободными в жидкости, сохраняли свою форму и не превращались в гранулы. Бациллы, переносимые лимфатическим током, быстро распространялись по всему телу. Однако очень скоро после инокуляции некоторые лейкоциты начинали поглощать бациллы, которые внутри этих клеток превращались в сферические тельца. Позже фагоцитарная реакция усиливалась, и через 15–20 часов все бациллы обнаруживались внутри лейкоцитов. Легко было продемонстрировать, что эти бациллы были поглощены в живом состоянии. Через сорок восемь часов после инокуляции в лимфе спинного мешка не было обнаружено никаких бацилл ни внутри, ни вне клеток. Но эта жидкость при посеве на питательные среды давала колонии Bacillus pyocyaneus вплоть до 15 и даже 18 дней после инокуляции.

Из этих фактов мы можем сделать вывод, что холоднокровные позвоночные способны приобретать иммунитет в слабой степени и что при этом приобретенном иммунитете можно наблюдать выраженный фагоцитоз, но не бактерицидное действие жидкостей.

Чтобы получить более полное представление о механизме приобретенного иммунитета, необходимо наблюдать его у высших позвоночных, у которых легко достигается хорошо развитый иммунитет этого типа. Здесь мы должны прибегнуть к млекопитающим и рассмотреть достаточное количество примеров, прежде чем мы попытаемся дать нашим читателям общее резюме вопроса.

Долгое время исследования приобретенного иммунитета ограничивались почти исключительно анализом фактов, наблюдаемых у животных, подвергнутых противосибиреязвенной вакцинации с помощью двух вакцин Пастера. Таким образом было собрано большое количество важных фактов, наиболее весомые из которых должны быть представлены читателю. Но прежде чем приступать к теме, необходима общая ориентация в вопросе приобретенного иммунитета у лабораторных животных к вибрионам, поскольку этот пример, так сказать, доминирует во всей главе о приобретенном иммунитете к микроорганизмам.

[223]

Фон Беринг и Ниссен [308] в своих исследованиях бактерицидной силы сывороток исследовали, среди прочих, несколько образцов сывороток, полученных от животных, вакцинированных против различных микроорганизмов. В большинстве приведенных ими примеров приобретенный иммунитет не вызывал увеличения этой силы, но сыворотка крови морских свинок, иммунизированных против вибриона Гамалеи (Vibrio metchnikovi), оказалась гораздо более бактерицидной в отношении этого микроорганизма, чем сыворотка нормальных восприимчивых морских свинок. Эти авторы пришли к выводу, что при приобретенном иммунитете, по крайней мере в отношении упомянутого вибриона, главная роль принадлежит бактерицидному веществу, которое развивается в жидкостях вакцинированных животных. Они ограничились простой демонстрацией этого факта, не пытаясь проследить ход событий при разрушении вибрионов, как это происходит в организме вакцинированной морской свинки. Р. Пфайффер [309] в сотрудничестве с Исаевым стремился восполнить этот пробел. Но вместо того чтобы взять вибрион Гамалеи, эти наблюдатели сосредоточили свое внимание на изучении приобретенного иммунитета морских свинок к холерному вибриону. Поскольку этот вибрион, как правило, менее вирулентен, чем вибрион Гамалеи, для получения смертельной инфекции необходимо было вводить его не в подкожную клетчатку, а в брюшную полость. Мы уже видели (глава VI), что холерный вибрион при инокуляции в брюшную полость морской свинки встречает там энергичное сопротивление со стороны лейкоцитов, которые захватывают живые и вирулентные вибрионы и, переваривая их, избавляют животное от их присутствия. Но когда доза вибрионов увеличивается, они размножаются, несмотря на фагоцитарную реакцию; они обнаруживаются роящимися в брюшной полости, откуда они вторгаются в лимфатические и кровеносные сосуды и вызывают смерть животного. Таким образом, легко вызвать смертельную инфекцию морской свинки холерным вибрионом. Но также легко вакцинировать этих животных против этой экспериментальной болезни. Нам нужно только инокулировать их несмертельным количеством живых холерных вибрионов или ввести им культуру, в которой вибрионы были убиты нагреванием, или часть культуральной жидкости, из которой вибрионы были удалены фильтрацией. Все эти методы вскоре вызывают приобретенный иммунитет у морских свинок. Если после того, как это было достигнуто, взять немного крови и добавить к сыворотке небольшое количество холерных вибрионов in vitro, мы легко можем продемонстрировать их исчезновение под влиянием бактерицидного вещества, растворенного в жидкости. В этом отношении, следовательно, существует заметная аналогия с фактом, установленным фон Берингом и Ниссен в отношении вибриона Гамалеи.

[224]

Когда в брюшную полость вакцинированных морских свинок вводится определенное количество холерной культуры, содержащей вирулентные и очень подвижные вибрионы, мы обнаруживаем, что в перитонеальной жидкости, извлеченной с помощью тонкой пипетки, вибрионы претерпели глубокие изменения в рефрактерном организме. Даже через несколько минут после инъекции вибрионов лейкоциты почти полностью исчезают из перитонеальной жидкости; и обнаруживаются лишь несколько мелких лимфоцитов и большое количество вибрионов, большинство из которых уже превратились в гранулы (рис. 39); и представлен наиболее типичный случай феномена Пфайффера. Рядом с круглыми гранулами можно увидеть набухшие вибрионы и другие, сохранившие свою нормальную форму, но все они абсолютно неподвижны. Некоторые из этих гранул собраны в небольшие комки, другие остаются изолированными в жидкости. Когда к висячей капле, содержащей эти трансформированные вибрионы, добавляется небольшое количество разбавленного водного раствора метиленового синего, мы наблюдаем, что некоторые гранулы окрашиваются очень глубоко, в то время как другие приобретают лишь очень бледный оттенок, едва заметный. Многие из этих гранул все еще живы, потому что легко наблюдать, как они развиваются вне животного и удлиняются в новые вибрионы. Однако большое количество гранул больше не проявляет никаких признаков жизни и явно мертво. Р. Пфайффер и некоторые другие наблюдатели утверждают, что гранулы могут быть полностью растворены в перитонеальной жидкости, точно так же, как кусочек сахара растворяется в воде. Мы неоднократно искали это исчезновение гранул в висячих каплях перитонеальной жидкости, не будучи в состоянии обнаружить какое-либо уменьшение числа этих трансформированных вибрионов даже спустя несколько дней; также мы не смогли наблюдать явление растворения гранул. Во всяком случае, бесспорно, что эта гранулярная трансформация является проявлением очень глубоких поражений, перенесенных холерными вибрионами под влиянием перитонеальной жидкости иммунизированного животного.

Рис. 39. Холерные вибрионы в брюшной полости, демонстрирующие феномен Пфайффера.

[225]

Была предпринята попытка более точно определить механизм феномена Пфайффера, и Фишер [310] стремился отнести его к осмотическому действию, оказываемому солями жидкостей, в которых взвешены вибрионы. Говорят, что эти вибрионы под действием сред, более богатых или более бедных солями, чем жидкость, в которой они развивались, проявляют увеличение своего внутреннего давления, вследствие чего вибрионы набухают или позволяют сферической капле протоплазмы вырваться у одного из их полюсов. Это объяснение было недостаточно обосновано его автором и не может считаться доказанным. С другой стороны, приходится прийти к выводу, что гранулярная трансформация обусловлена, как мы увидим позже, ферментативным действием перитонеального экссудата.

В то время как вибрионы претерпевают эту трансформацию в брюшной полости иммунизированной морской свинки, животное оправляется от недомогания, которое является совершенно преходящим, и продолжает жить, в то время как нормальные невакцинированные морские свинки погибают, а огромное количество вибрионов роится в перитонеальном экссудате. Разница между двумя животными наиболее поразительна, и мы легко можем понять, что Пфайффер был настолько впечатлен ею, что был склонен приписывать приобретенный иммунитет своих морских свинок исключительно гранулярной трансформации, вызванной бактерицидным веществом, содержащимся в жидкостях иммунизированных животных.

[226]

Легкость, с которой мы можем получить представление об изменении формы вибрионов под влиянием жидкостей организма, значительно помогает изучению бактерицидного вещества. Прежде чем переходить к вопросу о роли, которую играет это вещество в приобретенном иммунитете, мы должны на мгновение рассмотреть основные свойства этого приобретенного иммунитета. Очень заметная в перитонеальной жидкости, способность вызывать феномен Пфайффера столь же очевидна в сыворотке крови иммунизированных морских свинок, как это было продемонстрировано Борде. Капля этой сыворотки, когда она совсем свежая, легко и быстро превращает множество вибрионов в гранулы. Когда сыворотка хранится несколько дней или была нагрета до 55° C в течение часа, происходит полное исчезновение вещества, которое вызывает феномен Пфайффера. Это сразу выдает присутствие микроцитазы в жидкостях морских свинок, которые приобрели иммунитет против холерного вибриона. Тем не менее сыворотка крови и перитонеальная жидкость этих животных, будучи лишенными своей микроцитазы путем нагревания до 55° или 56° C, все еще сохраняют замечательную силу воздействия на вибрионы. Эти организмы больше не подвергаются гранулярной трансформации под влиянием нагретых жидкостей организма, но они лишаются всякой способности к движению, агглютинируют в комки и приобретают особую восприимчивость к действию цитазы. Вскоре после открытия феномена Пфайффера я [311] смог продемонстрировать, что эта гранулярная трансформация может быть получена in vitro при следующих условиях. Подготовьте висячую каплю с сывороткой крови морской свинки, вакцинированной против холерного вибриона, сывороткой, которая потеряла способность самостоятельно превращать вибрионы в гранулы. Добавьте к ней каплю перитонеальной лимфы нормальной невакцинированной морской свинки; эта лимфа содержит мертвые или живые лейкоциты и сама по себе также неспособна вызывать феномен Пфайффера. Когда к смеси этих двух жидкостей, которые неактивны при использовании по отдельности, добавляется несколько холерных вибрионов, они быстро превращаются в гранулы. Эта трансформация, полученная in vitro, удивительно похожа на ту, что происходит в брюшной полости вакцинированного животного.

Жюль Борде [312], работавший в моей лаборатории, провел очень полное исследование феномена Пфайффера вне организма животного и обнаружил, что в моем эксперименте перитонеальная лимфа может быть заменена сывороткой крови вакцинированной морской свинки, не препятствуя при этом ни в малейшей степени гранулярной трансформации. После особенно тщательного изучения вопроса он пришел к выводу, что феномен Пфайффера является результатом действия двух веществ. Одно из них обнаруживается в сыворотке крови и в перитонеальной жидкости морских свинок, вакцинированных против холеры, нагретых до 55°–56° C или лишенных каким-либо иным способом их индивидуальной способности превращать вибрионы в гранулы. Это вещество сопротивляется такой температуре и теряет свою активность только при нагревании до 68°–70° C. Второе из двух веществ, то, которое обнаруживается в перитонеальной лимфе или в сыворотке крови нормальной морской свинки, с другой стороны, разрушается при 55°–56° C и является не чем иным, как обычной цитазой (или алексином), присутствующей в жидкостях нормальных животных.

[227]

Факты, которые мы описали в отношении феномена Пфайффера в жидкостях организма иммунизированных животных, должны, следовательно, интерпретироваться следующим образом. Свежий перитонеальный экссудат или сыворотка крови этих животных легко вызывает гранулярную трансформацию, потому что в этих жидкостях обнаруживаются оба необходимых вещества. Но поскольку микроцитаза является очень нестабильным веществом, которое под влиянием времени или нагревания до 55°–56° C разрушается, жидкости иммунизированных животных очень легко лишаются ее. Сыворотка крови затем, после некоторого пребывания вне организма, становится неспособной превращать вибрионы в гранулы; но когда к ней добавляется небольшое количество цитазы, обнаруженной в сыворотке крови или в перитонеальной лимфе нормальной морской свинки, трансформация происходит с большой быстротой. К сыворотке иммунизированного животного, которая стала неактивной, возвращается ее свойство вызывать феномен Пфайффера. Эта интерпретация, сформулированная Борде, соответствует всей совокупности известных данных и в настоящее время общепринята.

[228]

Поскольку жидкости иммунизированных животных, ставшие неспособными превращать вибрионы в гранулы, все еще сохраняют свою способность лишать эти организмы подвижности и объединять их в комки, можно было бы спросить, не может ли это агглютинирующее вещество быть тем веществом, стабильным при нагревании, которое необходимо для возникновения феномена Пфайффера. Некоторое время, действительно, полагали, что этот феномен обусловлен микроцитазой, действующей на вибрионы, которые были предварительно модифицированы агглютинирующим веществом. Это последнее вещество сопротивляется нагреванию до 55°–56° C, разрушается только при более высоких температурах и сохраняется в сыворотке крови долгое время после того, как цитаза полностью исчезла. Аналогия между агглютинирующим веществом жидкостей животных, приобретших иммунитет, и веществом в тех же жидкостях, которое стабильно при нагревании, неоспорима, и все же эти два вещества не идентичны. Целый ряд наблюдений, которые мы опишем в дальнейшем, ясно демонстрирует этот тезис. Сыворотка может быть высокоагглютинирующей, не будучи способной вызвать трансформацию вибрионов в гранулы; обратное также верно. Вещество, которое вызывает феномен Пфайффера и которое обнаруживается в жидкостях иммунизированных морских свинок, является «фиксирующим веществом», аналогичным тем, с которыми мы уже встречались в сыворотках животных, адаптированных таким образом, что они способны резорбировать различные клеточные элементы. Как при резорбции клеток, так и при разрушении микроорганизмов фиксирующие вещества специфичны. Вещество, которое способствует трансформации в гранулы, отличается не только от фиксирующих веществ, которые сенсибилизируют красные кровяные тельца или сперматозоиды, но также от фиксирующих веществ, которые сенсибилизируют бактерии. Эта специфичность была продемонстрирована и тщательно изучена Пфайффером, который показал, что она может даже служить для различения видов бактерий. Сыворотка морской свинки, которая была иммунизирована против холерного вибриона, сделает чувствительными эти вибрионы, и только их, к действию микроцитазы. Даже родственные вибрионы, такие как различные водные вибрионы, например, не чувствительны к фиксирующему веществу антихолерной сыворотки. С другой стороны, сыворотки, полученные после инокуляции этих водных вибрионов, неспособны вызывать гранулярную трансформацию у холерного вибриона.

Когда мы вводим одному и тому же животному несколько видов вибрионов, мы получаем сыворотку или перитонеальную жидкость, которая вызывает феномен Пфайффера с вибрионами всех видов, которые были использованы для проведения инокуляций. Эта антивибрионная сыворотка содержит только одну цитазу для вибрионов, но содержит столько же различных фиксирующих веществ, сколько было инокулировано видов.

[229]

Трансформация вибрионов в гранулы, когда она вызывается в высокой степени против вирулентных вибрионов под влиянием жидкостей организма иммунизированных животных, дает очень ценное указание на одновременное присутствие цитазы и специфического фиксирующего вещества. Как мы уже заявляли в начале этого отчета о приобретенном иммунитете морских свинок против холерного вибриона, феномен Пфайффера проявляется в перитонеальной жидкости этих животных в очень короткое время (5–20 минут) после инокуляции вибрионов. Это доказывает, что в этой жидкости два вещества действительно встречаются вместе и что фиксирующее вещество и цитаза находятся в растворе в плазме экссудата. Так ли это в каждой части тела иммунизированных морских свинок? Если вместо введения холерного вибриона в брюшную полость мы вводим его в подкожную клетчатку или в переднюю камеру глаза этих животных, феномен Пфайффера не появляется. Вибрионы, изолированные или собранные в небольшие комки, не подвергаются гранулярной трансформации; они сохраняют свою нормальную форму вибриона и остаются живыми гораздо дольше, чем в брюшной полости. Некоторые из них могут быть найдены еще живыми через 24 часа после подкожной инъекции и через несколько (4–6) дней в передней камере глаза. Также феномен Пфайффера нельзя наблюдать, когда холерный вибрион вводится в отек стопы, вызванный вследствие замедления кровообращения, при этом вибрионы остаются живыми довольно долгое время. Эти факты ясно указывают на то, что в жидкости, выброшенной при пассивном отеке, так же как в водянистой влаге глаза или в подкожной клетчатке, два вещества, необходимые для возникновения гранулярной трансформации, отсутствуют. Отсутствуют ли оба или только одно? На этот вопрос легко ответить, добавив к упомянутым жидкостям сыворотку нормальной морской свинки, сыворотку, которая сама по себе неспособна вызывать феномен Пфайффера. Борде [313] провел эти эксперименты и обнаружил, что когда к жидкости пассивного отека иммунизированной морской свинки добавляется нормальная сыворотка, эта жидкость превращает холерный вибрион в гранулы, но делает это в меньшей степени, чем сыворотка той же иммунизированной морской свинки, нагретая до 55°–56° C, к которой также была добавлена нормальная сыворотка. Следовательно, есть основания сделать вывод, что жидкость отека не содержит никакой цитазы, но содержит определенное количество холерного фиксирующего вещества, однако в меньшем количестве, чем то, которое обнаруживается в сыворотке крови. Что касается водянистой влаги глаза иммунизированных животных, аналогичные эксперименты продемонстрировали, что она не содержит ни одного из двух веществ, необходимых для возникновения феномена Пфайффера.

С помощью фактов, которые я здесь суммировал, мы приходим к следующему выводу. У животного, иммунизированного против холерного вибриона, микроцитаза обнаруживается в перитонеальном экссудате; однако она не переходит ни в жидкость пассивного отека, ни в водянистую влагу глаза; холерное фиксирующее вещество обнаруживается в перитонеальной жидкости и переходит в отек, но не проникает в жидкость глаза. Это указывает на то, что микроцитаза обнаруживается в жидкостях, богатых лейкоцитами, но отсутствует в тех, которые содержат очень мало этих клеток или не содержат их вовсе.

Введение вибрионов в брюшную полость иммунизированных морских свинок сразу вызывает феномен Пфайффера и в то же время вызывает исчезновение большинства лейкоцитов из перитонеальной лимфы. У нас уже был случай несколько раз говорить об этом фаголизе, потому что он возникает как следствие инъекции в брюшную полость крови, семенной жидкости и всех видов жидкостей. Чем больше количество введенной жидкости и чем больше разница температуры между ней и содержимым нормальной брюшины, тем энергичнее фаголиз.

[230]

Пиераллини [314], работавший в моей лаборатории, изучая фаголиз в брюшной полости морской свинки, получил несколько результатов, заслуживающих внимания. Из всех жидкостей, использованных им, таких как вода, бульон, фильтрованные культуры микроорганизмов и физиологический солевой раствор, последний вызвал наименее интенсивный фаголиз, тем не менее достаточно хорошо выраженный. Сразу после инъекции любой из вышеуказанных жидкостей количество лейкоцитов в перитонеальной лимфе значительно уменьшается, клетки обнаруживаются собранными в комки на сальнике. Многие из них проявляют признаки ослабления и частичного разрушения. Рядом с лейкоцитами обнаруживаются фибринозные массы, что дает доказательство того, что некоторые из лейкоцитов были сильно повреждены и отдали фибрин-фермент, который вызывает коагуляцию фибрина. Когда Пиераллини вводил жидкости, содержащие цветные порошки во взвешенном состоянии, такие как индийская тушь и киноварь, он наблюдал, что эти вещества накапливались на большом сальнике, который окрашивался в черный или красный цвет. Микроскопическое исследование выявило наличие не очень интенсивного фагоцитоза и некоторое количество свободных цветных гранул посреди нитей фибрина.

[231]

Лейкоциты, которые во время этого фаголиза позволили фибрин-ферменту выйти наружу, могли также отдать некоторое количество своей микроцитазы. Эта микроцитаза перешла бы в перитонеальную жидкость и вызвала бы феномен Пфайффера. Если эта гипотеза верна, подавление фаголиза привело бы к отсутствию трансформации вибрионов в гранулы. Нетрудно проверить эту гипотезу, так как у нас есть средство предотвращения фаголиза или, по крайней мере, его значительного уменьшения. Исаев [315] в исследовании, проведенном в лаборатории Пфайффера, продемонстрировал, что внутрибрюшинная инъекция физиологического солевого раствора, бульона, мочи и т. д. укрепляет лейкоциты и приводит их в большом количестве в брюшную полость. Легко предвидеть, что такая инъекция послужила бы уменьшению интенсивности фаголиза. Фактически, если мы сначала введем несколько кубических сантиметров физиологического солевого раствора или свежего бульона в брюшную полость морской свинки и если на следующий день мы повторим ту же операцию, мы обнаружим, что после второй инъекции фаголиз гораздо менее мощный, чем после первой. Пиераллини, который повторил эти эксперименты, наблюдал, что фагоцитоз цветных гранул гораздо более полный у морских свинок, которые были обработаны предварительной инъекцией в брюшную полость. Количество фибрина на сальнике в этом случае гораздо меньше, и явления в целом показывают, что у этих морских свинок повреждение лейкоцитов значительно ослаблено.

Мы смогли продемонстрировать, что в случае, когда фаголиз таким образом уменьшен, феномен Пфайффера не производится или проявляется в очень слабой степени. Если эксперимент удается, жидкость, взятая из брюшной полости морской свинки, подготовленной накануне, а затем инокулированная культурой холеры, мутная и густая, как гной. Она содержит массу лейкоцитов в хорошем состоянии, большое количество которых за несколько минут набивается множеством вибрионов. Плазма этого экссудата содержит мало вибрионов, и они сохраняют свою нормальную форму и не проявляют, за исключением редких случаев, гранулярного изменения. Чуть позже не остается никаких свободных вибрионов; все они содержатся внутри лейкоцитов. Пфайффер [316] высказался против фактов, которые я только что суммировал, потому что он никогда не мог предотвратить гранулярную трансформацию вибрионов, несмотря на подготовительную инъекцию хлорида натрия. Абель [317], который повторил эксперименты, выразил промежуточный взгляд: у морских свинок, подготовленных инъекциями накануне, он наблюдал, что одна часть вибрионов превратилась в гранулы, в то время как другая стала добычей лейкоцитов. Дело в том, что подавление фаголиза требует особых условий: бульон, который вводится, должен быть свежеприготовленным, и перед его введением в брюшную полость он должен быть нагрет до 37°–39° C. Даже когда эти меры предосторожности приняты, иногда случается, что эксперимент не очень успешен. При проведении эксперимента мы должны руководствоваться видом перитонеальной жидкости, извлеченной в маленькие стеклянные пипетки. Если жидкость, которая входит в трубку, прозрачная или едва мутная, это указывает на то, что фаголиз произошел, несмотря на подготовительную инъекцию. Эксперимент успешен в тех случаях, когда перитонеальный экссудат очень мутный и напоминает гной.

[232]

Поскольку демонстрация подавления феномена Пфайффера, так же как и фаголиза, имеет фундаментальное значение, я попросил М. Гарнье [318] провести дальнейшие эксперименты с целью окончательного решения вопроса. Используя целый ряд жидкостей для подготовительной инъекции, он обнаружил, что свежий бульон дает наилучшие результаты. У морских свинок, у которых фаголиз был сведен к минимуму, фагоцитоз начинался сразу после инъекции вибрионов. Через две–пять минут многие вибрионы обнаруживаются внутри лейкоцитов, свободные вибрионы теперь немногочисленны и не проявляют феномена Пфайффера. Гарнье в своих мемуарах приводит фотографические репродукции лейкоцитов, набитых вибрионами; они должны убедить самого закоренелого скептика. С момента публикации этой статьи не было выдвинуто никаких возражений, и этот вопрос о подавлении гранулярной трансформации вибрионов теперь можно считать окончательно решенным. Я с тех пор демонстрировал эту особенность многим наблюдателям, все из которых убедились в ее точности. Должно, следовательно, быть принято, что феномен Пфайффера не производится в брюшной полости, кроме случаев, когда есть фаголиз. Поскольку этот факт делает весьма вероятным, что микроцитаза, которая необходима для трансформации вибрионов, выходит из поврежденных лейкоцитов, становится необходимым проверить эту гипотезу серией других экспериментов. Если эта гипотеза хорошо обоснована, феномен Пфайффера не должен наблюдаться в тех местах тела, где нет или почти нет лейкоцитов, уже присутствующих. Эти условия могут быть реализованы путем введения холерных вибрионов в подкожную клетчатку или в переднюю камеру глаза морских свинок, которые хорошо вакцинированы против холерного вибриона. При этих условиях, как я продемонстрировал в своей работе о внеклеточном разрушении холерных вибрионов, вибрионы сохраняют свою нормальную форму и никогда не превращаются в гранулы. Пфайффер поставил под сомнение этот результат, заявив, что под кожей вакцинированных морских свинок гранулярная трансформация всегда производится, хотя и в более слабой форме и с большей задержкой, чем в брюшной полости. Противоречие между экспериментами Пфайффера и моими собственными может, однако, быть объяснено. При инокуляции вибрионов в подкожную клетчатку или во время извлечения экссудата, образовавшегося в месте инфекции, иногда производятся небольшие кровоизлияния, и определенное количество микроцитазы высвобождается из лейкоцитов, обнаруженных в выпоте крови; эти клетки также отдают в экстравазированную кровь часть своего фибрин-фермента. Когда эксперимент успешен, то есть когда не производится никакого кровоизлияния во время вовлеченных операций, подкожный экссудат содержит только нормальные вибрионы, без появления какого-либо следа феномена Пфайффера в жидкости.

[233]

Если бы внеклеточная трансформация вибрионов в гранулы была реальной причиной приобретенного иммунитета, отсутствие этого феномена в подкожной клетчатке вакцинированной морской свинки должно было бы привести к смерти животного. На самом деле этого не происходит, и животное сопротивляется инокуляции вибрионов. Этот вывод открыт для одного серьезного возражения. Поскольку холерный вибрион в подавляющем большинстве случаев неспособен вызывать смертельную инфекцию при инокуляции подкожно, даже у нормальных невакцинированных морских свинок, этот пример иммунитета должен быть помещен в категорию естественного иммунитета, вида иммунитета, который может зависеть от причин, отличных от тех, от которых зависит приобретенный иммунитет. Чтобы ответить на это возражение, необходимо было выбрать расу вибрионов, способную при введении подкожно вызывать смерть. Месниль [319], начальник моего лабораторного персонала, взялся провести эксперименты с вибрионом Массова, который рассматривается некоторыми авторами как принадлежащий к истинному холерному виду. При инокуляции подкожно незащищенным морским свинкам он вызывает местный отек, в котором вибрионы роятся; инфекция быстро становится генерализованной и вызывает смерть животного через 24 часа. Тем не менее этот вибрион при введении в подкожную клетчатку хорошо вакцинированных морских свинок полностью отражается этими животными, и не производится ни малейшего следа феномена Пфайффера. При этих условиях некоторое количество вибрионов сначала объединяется в массы, но значительное количество остается изолированным и подвижным. Через несколько часов после инокуляции количество комков уменьшается, а изолированные вибрионы становятся более многочисленными, факт, который указывает на определенную степень адаптации вибриона к среде, в которой он теперь находится. Но никогда, пока вибрионы остаются свободными в подкожном экссудате, они не превращаются в гранулы.

[234]

Салимбени [320] в исследовании, проведенном в моей лаборатории, стремился убедиться, производится ли феномен Пфайффера в подкожной клетчатке лошади, которая была гипериммунизирована против холерного вибриона. Это животное в течение периода 14 месяцев получало значительные количества этих микроорганизмов, и сыворотка его крови превращала вибрионы в гранулы с большой быстротой и интенсивностью. Несмотря на такие благоприятные условия для проявления феномена Пфайффера, он никогда не производился под кожей этой лошади. Вибрионы при введении в это положение становились полностью неподвижными в очень короткое время, но они сохраняли свою форму вибриона и оставались живыми в течение нескольких часов. Экссудат, извлеченный до 24 часов после инокуляции, все еще давал рост холерного вибриона.

Поскольку легче ввести без выпота крови холерный вибрион в переднюю камеру глаза, чем под кожу, и поскольку водянистая влага не содержит фиксирующего вещества, отсутствие гранулярной трансформации в первой из этих двух ситуаций было замечено даже самим Пфайффером. Демонстрация этого факта не представляет трудности, и в течение значительного периода мы можем наблюдать свободные и совершенно подвижные вибрионы, перемещающиеся в водянистой влаге. Экссудат из глаза содержит много этих живых организмов, которые при посеве на питательные среды появлялись как колонии, даже когда жидкость была извлечена из глаза спустя несколько дней после инокуляции.

[235]

Эти тщательно установленные факты показывают очень ясно, что микроцитаза встречается в жидкостях живого животного только в тех ситуациях, в которых есть много уже существующих лейкоцитов и при условиях, в которых клетки подвергаются более или менее выраженному фаголизу. Это может быть подтверждено решающим экспериментом. Когда мы вводим суспензию холерного вибриона прямо в вены морской свинки, хорошо вакцинированной против этих организмов и чья сыворотка производит in vitro феномен Пфайффера с большой быстротой, этот феномен не проявляется. Этот эксперимент был выполнен и описан Борде [321]. Введя суспензию этого вибриона в яремную вену морской свинки, вакцинированной против холерного вибриона, он убил животное час спустя и обнаружил в крови сердца вибрионы, которые сохранили в целости свою форму и свое свойство окрашиваться метиленовым синим. Культивирование крови сердца, печени и селезенки дало рост вибрионов. У другой морской свинки, гипервакцинированной против того же организма и инокулированной тем же методом, кровь, взятая вскоре (4–15 минут) спустя, показала в препаратах, обработанных метиленовым синим, хорошо окрашенные вибрионы, нормальной формы и совершенно неповрежденные. Это самое прямое доказательство отсутствия феномена Пфайффера в жидкости крови живого животного, которое пользуется очень выраженным приобретенным иммунитетом. Неповрежденные вибрионы были помещены внутри лейкоцитов.

Левадити [322] повторил эти эксперименты в моей лаборатории и варьировал условия, при которых вибрионы вводились в кровеносные сосуды. Он иногда был способен наблюдать фаголиз лейкоцитов крови и их почти полное исчезновение из периферического кровообращения. В этих случаях поврежденные лейкоциты накапливались в легочных капиллярах, и массы их были видны окружающими группы вибрионов, которые были превращены в гранулы. Было, однако, легко исключить фаголиз путем подготовки животных с помощью инъекций физиологического солевого раствора или бульона. При этих условиях лейкоциты оставались в токе крови и очень скоро поглощали вибрионы. В то время как вибрионы, которые были все еще свободны в плазме крови, сохраняли свою форму и окрашивающую способность неповрежденными, те, которые были найдены внутри микрофагов, были уже в значительной части превращены в гранулы. Скорость, с которой эти фагоциты поглощают вибрионы и вызывают изменения в них, действительно необычайна.

В этом случае, который дает типичный пример реакции животного организма при приобретенном иммунитете, мы видим очень выраженный и немедленный фагоцитоз. Это тот же самый процесс, который уже был описан как происходящий в брюшной полости вакцинированных морских свинок, в которых фаголиз отсутствовал как результат подготовительной инъекции. В подкожной клетчатке и в передней камере глаза, где феномен Пфайффера регулярно отсутствует, фагоцитоз следует своим обычным курсом и вызывает разрушение вибрионов. Этот результат был подтвержден неоднократно — см. работы Борде, Месниля и Салимбени, уже процитированные.

[236]

Нам нужно только сравнить распространение феномена Пфайффера и фагоцитоза у животных, которые иммунизированы против холерного вибриона, чтобы убедиться, что первый феномен является ограниченным, в то время как последний является общим. Мог бы быть выдвинут против последнего вывода факт отсутствия какого-либо поглощения вибрионов в перитонеальной жидкости морских свинок, которые иммунизированы, но не защищены против фаголиза. Когда немного перитонеальной жидкости извлекается маленькими трубками вскоре после инъекции вибрионов в брюшную полость, на самом деле, виден только очень интенсивный феномен Пфайффера, фагоцитоз при этом полностью или почти полностью отсутствует. Но эта процедура недостаточна. Если мы хотим получить представление о том, что действительно происходит в брюшной полости, животное должно быть убито, а брюшина и особенно сальник очень тщательно исследованы. Как впервые продемонстрировали Макс Грубер [323] и позже Кантакузен [324], большой сальник в этих случаях покрыт толстым слоем, который содержит большое количество лейкоцитов, из которых некоторые заполнены вибрионами; далее, этот слой содержит массу вибрионов, частично превращенных в гранулы, частично агглютинированных или изолированных и сохраняющих свою вибрионную форму неповрежденной. С течением времени фагоцитоз становится все более и более выраженным, и невозможно отрицать его существование или приписывать ему лишь второстепенную роль.

Мы видели, что подавление феномена Пфайффера в брюшной полости и в крови или его полное отсутствие в передней камере глаза ни в малейшей степени не лишает вакцинированную морскую свинку ее приобретенного иммунитета. Животное сопротивляется вибрионам совершенно, без того чтобы они требовали превращения в гранулы в жидкостях организма. Эта трансформация действительно происходит, но только внутри фагоцитов. Как уже было заявлено в дискуссии о естественном иммунитете (главы VI, VII), вибрионы после того, как были поглощены микрофагами, почти немедленно претерпевают внутри этих клеток изменение формы, очень похожее на то, которое наблюдается в реальном феномене Пфайффера. Микрофаги часто полны количества гранул, производных от поглощенных вибрионов, которые в короткое время полностью перевариваются. Этот факт, столь постоянного возникновения в фагоцитозе вибрионов, доставляет нам еще одно доказательство микрофагического происхождения микроцитазы.

[237]

Если феномен Пфайффера является лишь частным случаем трансформации вибрионов в гранулы в жидкостях, содержащих микроцитазу, вполне естественно, что его подавление не должно вовлекать смертельную инфекцию вакцинированных животных. С другой стороны, если фагоцитарная реакция, столь широко отличающаяся, действительно играет важную роль в приобретенном иммунитете, все, что мешает фагоцитозу, должно в то же время компрометировать рефрактерное состояние. С целью решения этого вопроса Кантакузен [325], работавший в моей лаборатории, предпринял детальное исследование этого пункта. Он показал, что инъекция опия в несмертельной дозе наркотизировала морскую свинку и в то же время предотвращала движения лейкоцитов. Маленькие стеклянные трубки, содержащие холерные вибрионы и введенные под кожу вакцинированных морских свинок, наполнялись количествами лейкоцитов у ненаркотизированного животного; у морской свинки, которая получила настойку опия, трубки, оставленные на несколько часов, не содержали лейкоцитов, и только позже они начали входить в трубки. Когда сильная доза холерных вибрионов была введена в брюшную полость тщательно вакцинированных морских свинок, животные легко сопротивлялись инокуляции. Когда, однако, аналогично вакцинированные морские свинки были подвергнуты влиянию настойки опия, та же доза вибрионов вызывала их смерть. У этих наркотизированных животных, несмотря на значительную дилатацию и гиперемию сосудов и несмотря на выраженный гиперлейкоцитоз крови, диапедез не производился в течение первых нескольких часов после инъекции опия, и только позже (через 5–6 часов после инъекции) лейкоциты начали появляться в брюшной полости. Вибрионы пользуются периодом неактивности фагоцитов для размножения, сохраняя свою подвижность, а также свойство окрашиваться основными анилиновыми красителями. Когда задержанные лейкоциты делают свое появление в брюшной полости, они находят ее уже захваченной множеством вибрионов. Несмотря на это, лейкоциты, особенно микрофаги, поглощают огромное количество организмов; это не предотвращает смерть морских свинок, хотя она происходит на несколько часов позже, чем у невакцинированных контрольных животных. В момент смерти свободные вибрионы больше не обнаруживаются в экссудате; они все были поглощены микрофагами, внутри которых они претерпели гранулярную трансформацию. При проведении посмертного исследования животного большое количество маленьких кучек вибрионов, таких, которые никогда не встречаются у животных, не подвергавшихся действию опия, обнаруживаются на сальнике.

[238]

Все, что необходимо, следовательно, это задержать фагоцитарную реакцию на несколько часов, чтобы заставить хорошо вакцинированных морских свинок поддаться действию вибрионов. Можно легко понять, что с этим результатом перед нами не может быть никакого колебания в приписывании фагоцитозу гораздо более важной роли в обеспечении приобретенного иммунитета, чем феномену Пфайффера.

Изучение других болезней, производимых вибрионами, только служит для подтверждения общих выводов, которые следуют из детального изучения существенных процессов при приобретенном иммунитете против холерного вибриона. Здесь необходимо вспомнить открытие фон Берингом и Ниссен очень выраженной бактерицидной силы сыворотки крови морских свинок, которые были вакцинированы против вибриона Гамалеи. Когда этот факт был впервые продемонстрирован, мы были оправданы в мысли, что вибриоцидное свойство крови могло бы само по себе объяснить этот приобретенный иммунитет; но сравнительное изучение явлений, которые происходят in vitro с теми, которые происходят в живом животном, вскоре продемонстрировало, сколь слабо было основание для этой гипотезы. В то время как вибрионы при посеве в сыворотку крови гипервакцинированных морских свинок там погибали в больших количествах или даже все целиком, эти же организмы при инокуляции в подкожную клетчатку тех же животных оставались живыми в течение нескольких дней. Вибрион Гамалеи гораздо менее способен к превращению в гранулы, чем холерный вибрион, и мы находим, что он сохраняет свою нормальную форму даже внутри лейкоцитов. Нет случая в этом деле, следовательно, искать феномен Пфайффера.

[239]

Быстрое и выраженное разрушение вибриона Гамалеи in vitro в сыворотке крови вакцинированных морских свинок, а также длительное выживание этих организмов в живом животном служат дополнительным доказательством того, что эти две группы явлений не могут быть идентичными. С другой стороны, это дает дальнейшее подтверждение того, что в процессе подготовки сыворотки, параллельно с коагуляцией, происходит другой процесс, который придает сыворотке бактерицидные свойства. Совершенно очевидно, что, как и в случае с холерным вибрионом, мы имеем здесь дело с высвобождением микроцитазы за счет разрушенных или поврежденных лейкоцитов. Действуя совместно со специфическим фиксирующим веществом жидкостей организма, эта цитаза вызывает гибель вибрионов, введенных в сыворотку. В живом организме, поскольку микроцитаза не находится в свободном состоянии, эти вибрионы, хотя и подвергаются воздействию фиксирующего вещества, сопротивляются до тех пор, пока не становятся добычей фагоцитов. В исследовании, которое было предметом сообщения на Международном конгрессе гигиены в Лондоне в 1891 году [326], я продемонстрировал, что фагоцитарная реакция протекает с большой интенсивностью у морских свинок, вакцинированных против вибриона Гамалеи. Инокуляция этого организма в подкожную клетчатку, вызывающая быстро смертельную инфекцию у невакцинированных морских свинок, приводит у иммунизированных животных к образованию обильного экссудата, в котором многочисленные вибрионы вскоре встречают сопротивление со стороны фагоцитов. Эти фагоциты поглощают живые вибрионы, удерживая их некоторое время внутри себя, но в конечном итоге всегда полностью переваривают их. Во время последней фазы этой борьбы мы иногда обнаруживаем внутри лейкоцитов вибрионы, превратившиеся в сферические гранулы. Именно с этими клетками, заполненными поглощенными вибрионами, мне удалось впервые провести эксперимент, который с тех пор повторялся неоднократно, всегда с тем же результатом. Когда у хорошо вакцинированной морской свинки берется капля подкожного экссудата на той стадии, когда все вибрионы уже некоторое время поглощены лейкоцитами, и переносится в виде висячей капли в термостат при 35°–37° C, обнаруживается, что поглощенные вибрионы развиваются внутри фагоцитов, погибших вне организма животного. Вибрионы сначала заполняют лейкоцит и, продолжая размножаться, заставляют клетку лопнуть, после чего они распределяются в жидкости висячей капли (рис. 40 и 41). Этот эксперимент доказывает, во-первых, что вибрионы были поглощены живыми, и, во-вторых, что плазма экссудата была неспособна предотвратить их дальнейшее развитие.

Рис. 40. Вибрионы (V. metchnikovi), развившиеся внутри микрофага от вакцинированной морской свинки.

Рис. 41. Вибрионы (V. metchnikovi), развившиеся в капле экссудата от вакцинированной морской свинки. Вибрионы разорвали микрофаг и рассеялись в жидкости.

[240]

[241]

Обобщив основные явления, проявляющиеся у вибрионов в организме животного, обладающего приобретенным иммунитетом, мы должны теперь выяснить, является ли способ разрушения и исчезновения, происходящий у этих вибрионов, общеприменимым. Естественно, мы начинаем это изучение со спирилл, которые во многих отношениях представляют большое сходство с вибрионами. Задача облегчается благодаря очень тщательной работе, недавно опубликованной Савченко [327] по Spirochaete obermeyeri возвратного тифа. Мы знаем из того, что было сказано в главе VI, что спирохеты, обнаруженные в сыворотке лиц, пораженных этим организмом, в брюшной полости морских свинок разрушаются при участии макрофагов. Эти фагоциты обеспечивают естественный иммунитет морской свинки против паразита возвратного тифа. У морских свинок, которым неоднократно вводили кровь или сыворотку, содержащую спириллы, разрушение этих микроорганизмов происходит иным путем. Когда Савченко ввел некоторое количество Spirochaete obermeyeri в брюшную полость таких подготовленных морских свинок, он отметил, что они претерпели трансформацию, напоминающую ту, что наблюдается при феномене Пфайффера. Вскоре большинство этих микроорганизмов приняло форму очень тонких спирилл, к которым были прикреплены круглые гранулы. Полного превращения спирилл в гранулы не произошло, но часть их содержимого выделилась в виде сферических капель. Спириллы, проявившие эти изменения, потеряли подвижность и собрались в комки. Безусловно, имела место внеклеточная трансформация спирилл, но она происходила только в брюшной полости. При введении в подкожную клетчатку подготовленной морской свинки спириллы вызывали в этом месте образование плотного, но скудного экссудата. В этом экссудате были обнаружены лейкоциты, содержащие спирохеты, которые сохранили свою нормальную форму. Эти микроорганизмы находились исключительно в макрофагах и не проявляли признаков возникновения феномена Пфайффера. Подобное отсутствие этого феномена наблюдалось у нормальных морских свинок, которым подкожно вводили такое же количество спирилл. Однако у этих животных отек, появившийся на месте инокуляции, был обильным и мягким, а исчезновение спирилл, то есть их поглощение макрофагами, происходило значительно позже, чем у подготовленных морских свинок. Таким образом, мы имеем в этом отношении полную аналогию с вибрионами: в обоих случаях отсутствует гранулярная трансформация под кожей и происходит поглощение лейкоцитами экссудата; с другой стороны, мы имеем феномен Пфайффера, появляющийся в перитонеальной жидкости. Эта аналогия простирается еще дальше. Так, у морских свинок, подготовленных повторными инъекциями человеческой сыворотки, богатой спириллами, Савченко мог подавить феномен Пфайффера в брюшной полости так же легко, как и в случае с вибрионами. Все, что ему нужно было сделать, — это ввести определенное количество бульона в брюшную полость своих иммунизированных морских свинок. Двадцать четыре часа спустя, при введении спирилл животным в то же самое место, они сохраняли подвижность в течение нескольких часов, не проявляли никакой гранулярной трансформации и в конечном итоге полностью поглощались макрофагами.

[242]

Эти факты приводят нас к заключению, что судьба спирохет возвратного тифа в организме морских свинок, подготовленных предварительными инъекциями, подчиняется тем же законам, что были установлены для приобретенного иммунитета против вибрионов. Спириллы поглощаются и разрушаются фагоцитами, за исключением случаев, когда происходит фаголиз, при котором цитаза, высвобождаясь, атакует микроорганизмы вне лейкоцитов.

[243]

После открытия гранулярной трансформации вибрионов Р. Пфайффер в сотрудничестве с несколькими своими учениками задался целью выяснить, насколько этот феномен является общим при приобретенном иммунитете. Он направил свое внимание на брюшнотифозный коккобацилл, о котором он уже опубликовал [328] очень подробный отчет о работе, выполненной совместно с Колле. Эти исследователи воспользовались открытием, сделанным Боймером и Пейпером [329], а также Шантемессом и Видалем [330] и подтвержденным другими наблюдателями, что лабораторных животных, особенно мышей и морских свинок, можно легко вакцинировать против смертельного заболевания, вызываемого микроорганизмом брюшного тифа. Как и при экспериментальном заражении морской свинки холерным вибрионом, вакцинация животных против брюшнотифозной палочки могла быть осуществлена очень легко, либо с использованием стерилизованных культур, либо жидкостей культур, очищенных от организмов путем фильтрации. У мелких лабораторных животных таким образом может быть получен весьма выраженный приобретенный иммунитет, и изучение явлений, возникающих в вакцинированном организме, дало доказательства общей аналогии с теми, что наблюдались при использовании вибрионов. В брюшной полости иммунизированных морских свинок феномен Пфайффера в собственном смысле слова не проявляется, то есть лишь немногие бациллы превращаются в гранулы, подавляющее большинство сохраняет свою бациллярную форму; тем не менее они, очевидно, сильно повреждены: они становятся неподвижными и более или менее полностью агглютинируют в комки. Однако, если несколько таких микроорганизмов высеять на питательные среды, они свободно размножаются и дают обильный рост. Таким образом, перитонеальная жидкость действует на брюшнотифозную палочку совершенно определенно, но в гораздо меньшей степени, чем перитонеальный экссудат морских свинок, иммунизированных против холерного вибриона. В обоих случаях мы имеем выраженный фаголиз, который высвобождает микроцитазу, действие которой на вибрион более заметно, чем на бациллу брюшного тифа. Это внеклеточное действие на брюшнотифозную палочку в брюшной полости можно легко предотвратить предварительной инъекцией бульона, физиологического солевого раствора или нормальной сыворотки за двадцать четыре часа до этого. Подавление фаголиза, как и в случае с вибрионами и спириллами, сопровождается подавлением внеклеточного действия на брюшнотифозные палочки.

Такая же аналогия наблюдается в явлениях, возникающих под кожей. Брюшнотифозная палочка при введении в подкожную клетчатку вакцинированных морских свинок, хотя и не повреждается заметно жидкостью экссудата, подвергается некоторой агглютинации. Повреждающее действие жидкостей организма здесь еще менее эффективно, чем в брюшной полости. Но, как и в брюшной полости вакцинированных морских свинок, предварительно обработанных бульоном, так и в подкожном экссудате именно фагоциты разрушают микроорганизмы. В обоих случаях наблюдается очень большой приток лейкоцитов, главным образом микрофагов. Эти клетки поглощают и переваривают бациллы, которые в конечном итоге исчезают. Микроорганизмы, поглощенные микрофагами, попав внутрь этих фагоцитов, превращаются в гранулы, очень похожие на те, что наблюдались у холерного вибриона при аналогичной обработке. В этом отношении аналогия между двумя микроорганизмами полная.

[244]

Оппель, работая в моей лаборатории, повторил работу Кантакузена о замедляющем действии опия на фагоцитарный процесс. Он получил те же результаты: под влиянием наркотика лейкоциты вмешивались только на поздней стадии, в результате чего вакцинированные морские свинки погибали от брюшнотифозной инфекции. Тот же вывод следует сделать из экспериментов, проведенных А. Вассерманом [331]. Морские свинки, иммунизированные против брюшнотифозной палочки, были полностью устойчивы к дозе, которая всегда была смертельной для контрольных животных. Однако, когда вместе с этой дозой бацилл вводится определенное количество (3 куб. см) сыворотки, препятствующей фагоцитарной реакции, морские свинки теряют свой иммунитет и погибают от брюшнотифозной инфекции. Сыворотка, использованная Вассерманом, была получена от кроликов, обработанных сывороткой крови морских свинок. Сыворотка кролика, приготовленная таким образом, нейтрализует действие цитазы морской свинки, но, как продемонстрировал Бесредка [332], она также выполняет несколько других функций, одна из которых, в частности, — предотвращение фагоцитоза. Таким образом, в экспериментах Вассермана именно антифагоцитарная функция была важным фактором в подавлении приобретенного иммунитета морских свинок. Эти эксперименты дают новое доказательство большого значения фагоцитарной реакции в этом виде иммунитета и служат дальнейшим подтверждением аналогии между механизмом сопротивления организма животного против брюшнотифозной палочки и против холерного вибриона.

В присутствии этой поразительной аналогии нет необходимости далее настаивать на деталях приобретенного иммунитета животных против экспериментального заболевания, вызываемого микроорганизмом брюшного тифа. Будет лучше выбрать другой пример из группы бацилл. Возьмем сначала приобретенный иммунитет против бациллы синегнойного гноя (Bacillus pyocyaneus), которая в течение многих лет рассматривалась как лучший пример для изучения этого вида иммунитета. Шаррен, который первым получил заболевание с этой бациллой экспериментально, опубликовал несколько заметок [333] о приобретенном иммунитете кролика против нее. Он продемонстрировал возможность вакцинации этого животного не только живыми бациллами, но и продуктами их культуры; он изучал сыворотку крови вакцинированных животных, сравнивая ее с сывороткой нормальных кроликов, особенно в отношении ее действия на развитие Bacillus pyocyaneus. Хотя Шаррен не смог обнаружить в сыворотке иммунизированных кроликов бактерицидной силы в собственном смысле этого слова, он первым обратил внимание на некоторые модификации, которым подвергаются бациллы при выращивании в этой среде. Он отметил, что в этих условиях пиоцианин не вырабатывался, и в сотрудничестве с Роже продемонстрировал, что в сыворотке вакцинированного кролика Bacillus pyocyaneus образует пакеты, состоящие из маленьких цепочек большей или меньшей длины, тогда как в сыворотке нормального, восприимчивого кролика она развивается в форме нормальных палочек, причем палочки по большей части изолированы.

[245]

Из своих экспериментов in vitro Шаррен сделал вывод, что происходит заметное ослабление функций Bacillus pyocyaneus при воздействии на нее организма вакцинированного животного. Бушар [334] зашел так далеко, что разработал теорию приобретенного иммунитета, в которой главная роль приписывается невозможности микроорганизма, после того как он вторгся в рефрактерное животное, секретировать свои жидкие продукты; нет расширения сосудов и диапедез не происходит. Сравнительное наблюдение явлений, наблюдаемых у кроликов, восприимчивых к пиоцианической болезни, и тех, что встречаются у вакцинированных кроликов, однако, наиболее ясно демонстрирует невозможность принятия интерпретации Бушара. Инокуляция бациллы синегнойного гноя под кожу уха нормального (невакцинированного) кролика вызывает обширную воспалительную реакцию с выраженной гиперемией; диапедез белых кровяных телец происходит на сравнительно поздней стадии процесса, а фагоцитоз не начинается и не завершается до очень позднего времени. С другой стороны, у вакцинированных кроликов, инфицированных таким же образом, гиперемия уха незначительна, но диапедез происходит очень рано, и фагоцитоз начинается немедленно. Следовательно, не невозможность для лейкоцитов пересечь стенку сосуда из-за отсутствия расширения вен мешает им быстро пробраться к полю битвы; именно их несовершенная положительная чувствительность ответственна за запоздалый и неполный фагоцитоз. Эта интерпретация подтверждается в других случаях приобретенного иммунитета.

[246]

Совсем недавно Пауль Мюллер [335] сделал особый акцент на роли, которую играет бактерицидное действие сыворотки животных, вакцинированных против пиоцианической болезни. Для него отрицательные результаты, полученные его предшественниками, теряют свое значение, поскольку все их эксперименты проводились в условиях аэробности, тогда как только в отсутствие свободного кислорода эта бактерицидная сила может проявляться сколько-нибудь свободно. Мюллер, следовательно, задался целью сравнить в анаэробных условиях бактерицидное действие на Bacillus pyocyaneus сывороток, полученных от нормальных и от вакцинированных животных. Ему удалось продемонстрировать, что сыворотка крови вакцинированных животных более бактерицидна, чем сыворотка нормальных кроликов. Однако, прежде чем делать какой-либо вывод из этого наблюдения, необходимо ответить на следующий вопрос: сравнимы ли явления, наблюдаемые in vitro, с теми, что видны в живом организме? В предыдущих главах было так часто показано, что сыворотка крови, полученная после отделения внесосудистого сгустка, никоим образом не может быть идентифицирована с плазмой циркулирующей крови, что нет необходимости аргументировать этот вопрос далее. Если мы хотим получить ясное представление о механизме иммунитета в живом организме, мы должны наблюдать ход событий у вакцинированного животного, а не делать выводы из наблюдений in vitro, кроме как после тщательной проверки. Все работы по пиоцианическому иммунитету, обобщенные выше, подлежат упреку в том, что в них это правило не соблюдалось.

После открытия феномена Пфайффера у животных, вакцинированных против холерного вибриона, гораздо больше внимания стало уделяться изменениям, происходящим в животном, обладающем приобретенным иммунитетом. Вассерман [336] был первым, кто попытался применить открытие Пфайффера к Bacillus pyocyaneus. С помощью расы этой бациллы, сделанной более вирулентной, ему удалось вызвать смертельное экспериментальное заболевание у морской свинки, против которого он смог различными методами вакцинировать этих животных.

[247]

Он так описывает явления, наблюдаемые в брюшной полости иммунизированных морских свинок. Вскоре после инъекции бациллы синегнойного гноя становятся неподвижными, затем «палочки набухают и тают, как воск в горячей воде. Образование гранул, подобных тем, что происходят у холерного вибриона, наблюдалось редко. Процесс напоминает скорее тот, что происходит при экспериментальном брюшном тифе, как описано Р. Пфайффером. Во всех случаях феномен растворения происходит полностью в жидкости экссудата, без какого-либо участия со стороны лейкоцитов» (стр. 284). Мы видим, что мы все еще имеем дело с своего рода ослабленным феноменом Пфайффера, без какой-либо гранулярной смены, но с иммобилизацией бацилл. Поскольку Вассерман остался удовлетворен исследованием перитонеального содержимого, которое, как мы знаем, дает лишь несовершенную картину приобретенного иммунитета, Георгиевский [337] задался целью изучить этот вопрос более тщательно под моим руководством. С этой целью он вакцинировал серию морских свинок живыми бациллами синегнойного гноя, что является верным методом получения приобретенного иммунитета. При исследовании перитонеальной жидкости (взятой вскоре после инъекции бацилл) вакцинированных морских свинок он обнаружил, что бациллы были неподвижны и подверглись некоторой степени агглютинации. Они не превратились в гранулы, а стали толще и несколько более коренастыми. Эти изменения наблюдаются в период фаголиза, когда в жидкости брюшной полости обнаруживается лишь несколько разбросанных лейкоцитов. Примерно через два часа после инъекции бацилл лейкоциты начинают появляться в перитонеальном экссудате, особенно микрофаги, которые не теряют времени даром, захватывая бациллы, некоторые из которых превращаются в гранулы. Несколько часов спустя экссудат, содержащий множество лейкоцитов, больше не содержит свободных бацилл: все они находятся внутри микрофагов. Тем не менее, если каплю экссудата теперь взять и подержать некоторое время при температуре 37° C, будет обнаружено, что бациллы размножаются внутри мертвых фагоцитов вне организма животного. Мы таким образом получаем колонии бацилл, факт, который ясно доказывает, что эти бациллы, будучи еще живыми, были поглощены лейкоцитами. Этот эксперимент, следовательно, очень похож на тот, который мы описали в связи с вибрионом Гамалеи.